蛋白 A/G Plus 瓊脂糖的特點:
•蛋白 A/G – 蛋白 A 和蛋白 G 的抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的固定化重組融合蛋白可對幾乎任何哺乳動物物種進行多克隆 IgG 純化
• 瓊脂糖樹脂 – 支持物為交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B),這是蛋白親和純化方法的較常用樹脂
• 惰性且穩(wěn)定 – 的生產(chǎn)方法通過不帶電荷的抗浸出性共價鍵固定蛋白 A/G,因此非特異性結(jié)合較低且能夠多次使用而不降低得率
• 高容量 – Pierce 蛋白 A/G 瓊脂糖的 “Plus” 類型包含密集上樣量的固定化蛋白 A/G,提供大于 50 mg 人 IgG/mL 樹脂的結(jié)合容量
Pierce 蛋白 A/G Plus 瓊脂糖包含以高密度共價固定至高質(zhì)量交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B) 上的純化蛋白 A/G 重組融合蛋白。由于蛋白 A/G 結(jié)合了蛋白 A 和蛋白 G 的免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域,該樹脂可有效進行多種哺乳動物宿主物種中 IgG 抗體的親和純化。
蛋白 A/G 是一種基因工程化蛋白,結(jié)合了蛋白 A 和蛋白 G 的 IgG 結(jié)合結(jié)構(gòu)域。融合蛋白在大腸桿菌中表達(dá)。蛋白A/G含有蛋白A的四個Fc結(jié)合結(jié)構(gòu)域和蛋白G的兩個Fc結(jié)合結(jié)構(gòu)域,最終分子量為50,460道爾頓(SDS-PAGE中測得為40至45kDa)。蛋白 A/G 的 pH 依賴性低于單獨的蛋白 A,但具備蛋白 A 和 G 的累加特性。蛋白 A/G 可與所有的人 IgG 亞類結(jié)合,因此是用于純化尚未確定亞類的多克隆或單克隆 IgG 抗體的理想選擇。
Pierce 蛋白 A/G Plus 瓊脂糖使用 Thermo Scientific AminoLink 偶聯(lián)化學(xué)法制備,該方法與傳統(tǒng)配體固定方法相比具有多項優(yōu)勢。AminoLink 固定后,瓊脂糖珠的糖單體與蛋白 A 上的天然賴氨酸殘基通過簡單的酰胺鍵結(jié)合。與典型的溴化氰 (CNBr) 固定法不同,AminoLink 方法不引入任何新的化學(xué)基團,從而避免了可能導(dǎo)致的非特異性結(jié)合,并且形成基本不可逆的穩(wěn)定結(jié)合。所得的高結(jié)合容量樹脂在多輪抗體純化之后仍然能保留固定化蛋白 A/G 的結(jié)合功能。
交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B) 的特性:
•支持 pH 值穩(wěn)定性:2 至 14(短期);3 至 13(長期)
• 平均粒徑:45 至 165 微米
• 排阻極限:10,000至4,000,000 道爾頓
•體積流速:約1 mL/分鐘(對于1 cm 直徑柱)
•線性速度:30 cm/h
• 壓力:低于 25psi (1.5 bar);定義為樹脂可承受的跨色譜柱壓降(注:液相色譜裝置的指示表壓可能測量的是總系統(tǒng)壓力,而不是跨色譜柱壓降。)
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