1.在微量反應(yīng)板每孔加入待檢標(biāo)本50μl,設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照各2孔,每孔加入陽(yáng)性(或陰性)對(duì)照各1滴,并設(shè)空白對(duì)照1孔。
2.每孔加入酶結(jié)合物1滴(空白對(duì)照除外),充分混勻,封板,置37℃孵育30分鐘。
3.棄去孔內(nèi)液體,洗滌液注滿(mǎn)各孔,靜置5秒,甩干,重復(fù)5次后拍干。
4.每孔加顯色劑A液、B液各1滴,充分混勻,封板,置37℃孵育15分鐘。
5.每孔加終止液1滴,充分混勻。
6.用酶標(biāo)儀讀數(shù),取波長(zhǎng)450nm,先用空白孔校零,然后讀取各孔OD值。
優(yōu)質(zhì)的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。
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加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。