現(xiàn)貨:小鼠白三烯C4(LTC4)ELISA檢測試劑盒 北京
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方程生物HRP的底物
HRP催化過氧化物的氧化反應,代表性的過氧化物為H2O2,其反應式如下:
DH2+ H2O2 D+ H2O
上式中,DH2為供氧體,H2O2為受氫體。在ELISA中,DH2一般為無色化合物,經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物,以便作比色測定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。
OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色,用酸終止酶反應后,在492nm處有zui高吸收峰,靈敏度高,比色方便,是HRP結(jié)合物zui常用的底物。OPD本身難溶于水,OPD·2HCL為水溶性。曾有報道OPD有致異變性,操作時應予注意。OPD見光易變質(zhì),與過氧化氫混合成底物應用液后更不穩(wěn)定,須現(xiàn)配置現(xiàn)用。在試劑盒中,OPD和H2O2一般分成二組分,OPD可制成一定量的粉劑或片劑形式,片劑中含有發(fā)泡助溶劑,使用更為方便。過氧化氫則配入底物緩沖液中,有制成易保存的濃縮液,使用時用蒸餾水稀釋。*的ELISA試劑盒中則直接配成含保護劑的工作濃度為0.02% H2O2的應用液,只需加入OPD后即可作為底物應用液。
TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍色,目視對比鮮明。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定,可配成溶液試劑,只需與H2O2溶液混和即成應用液,可直接作底物使用。另外,TMB又有無致癌性等優(yōu)點,因此在ELISA中應用日趨廣泛。酶反應用HCL或H2SO4終止后,TMB產(chǎn)物由藍色呈黃色,可在比色計中定量,zui適吸收波長為405nm。
ABTS雖不如OPD和TMB敏感,但空白值極低,也為一些試劑盒所采用。
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