GeneArt™ 無縫克隆和組裝試劑盒

GeneArt™ 無縫克隆和組裝試劑盒可在單次 30 分鐘室溫反應(yīng)中將由任一序列組成的 1 至 4 個(gè) PCR 片段同時(shí)定向克隆至任一線性化載體中。該試劑盒包含 DNA 片段組裝以及將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌以供重組載體選擇和生長所需的所有試劑。

•快速容易—可在單個(gè)載體（長達(dá) 13 Kb）中同時(shí)克隆多達(dá) 4 個(gè) DNA 片段（含有您選擇的序列）；無需限制性酶切、連接或重組位點(diǎn)
•精確高效— 旨在使您能夠以您所需的方向在您所需的位點(diǎn)克隆您所需的片段，并且可獲得高達(dá) 90% 的正確克隆，并且不會(huì)留有額外序列
•載體靈活性— 使用我們的線性載體或您選擇的載體
•免費(fèi)工具— 使用我們可逐步引導(dǎo)您完成計(jì)劃的免費(fèi)網(wǎng)絡(luò)界面設(shè)計(jì) DNA 寡核苷酸等
•多種應(yīng)用— 通過快速組合、添加、刪除或交換 DNA 片段來簡化多種合成生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)

對于超過 4 個(gè) DNA 片段的克隆、最終分子大于 110 Kb 的情況或者使用的預(yù)先存在的 DNA 元件太長以致無法通過 PCR 進(jìn)行擴(kuò)增；請考慮使用 GeneArt™ 高階遺傳組裝系統(tǒng)（貨號 A13285）。

簡單快速的克隆創(chuàng)建
GeneArt™ 無縫克隆是一種簡單的兩步流程，包括基于試管的組裝反應(yīng)以及隨后轉(zhuǎn)化至 One Shot™ 化學(xué)感受態(tài) 0 大腸桿菌的過程。該試劑盒利用專有酶混合物的特性組裝具有共享末端同源性的 DNA 片段，并且不會(huì)留下任何額外序列或痕跡（無縫）。然后，將組裝反應(yīng)的一部分轉(zhuǎn)化至提供的感受態(tài) 0 細(xì)胞中，從而生成可用于次日分析的克隆。通過使用定制 DNA 寡核苷酸進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增可輕松設(shè)計(jì)所需的 15 個(gè)堿基對的末端同源性。

高效、靈活和精確的克隆
使用 GeneArt™ 無縫克隆和組裝試劑盒時(shí)，影響克隆效率的主要因素是 DNA 元件大?。?00 bp 至 5 Kb）、總最終分子大小 (≤ 13 Kb) 以及片段的質(zhì)量和特異性。PCR 片段的末端（A 突出端或平末端）不會(huì)影響克隆效率。

克隆至 pUC19L 的不同片段數(shù)量的典型克隆效率如下所示：
•對于單個(gè) 5 Kb DNA 元件，90%
• 對于 4 個(gè)片段（各 1 Kb），70%
• 對于 4 個(gè) DNA 片段（各 2 Kb），40%

克隆成功與否與插入片段序列和載體類型無關(guān)，您可以設(shè)計(jì)并添加幾乎所有所需的序列或序列組合至任何質(zhì)粒中，前提是質(zhì)?？赏ㄟ^限制性內(nèi)切酶酶切或者 PCR 進(jìn)行線性化。從反應(yīng)中獲得的環(huán)形克隆僅包含您的原始載體序列、插入片段和的同源性，無無關(guān)核苷酸插入。

電腦模擬克隆設(shè)計(jì)支持
GeneArt™ 無縫克隆中的一個(gè)關(guān)鍵步驟是具有適當(dāng)同源性和間距的片段和寡核苷酸的正確設(shè)計(jì)，以幫助確?？寺〕晒M裝。為簡化和加速設(shè)計(jì)流程，我們提供了一種免費(fèi)在線工具來幫助您通過電腦模擬設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。該工具可檢查實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與產(chǎn)品規(guī)格的兼容性，設(shè)計(jì)具有末端同源性的 DNA 寡核苷酸用于進(jìn)行克隆的不同元件的 PCR 擴(kuò)增，并向用戶展示載體的圖形表示以及與 Vector NTI™ 軟件兼容的 GenBank 格式的可下載注釋序列。

應(yīng)用
GeneArt™ 無縫克隆和組裝試劑盒設(shè)計(jì)用于在多種分子生物學(xué)和合成生物學(xué)等應(yīng)用中進(jìn)行克隆和 DNA 組裝實(shí)驗(yàn)。該產(chǎn)品可用于創(chuàng)建帶有可替換部分的模塊化表達(dá)載體，還可用于執(zhí)行在其他方面可能涉及多個(gè)步驟的多種任務(wù)。使用試劑盒以簡化：構(gòu)建融合蛋白、在現(xiàn)有載體中刪除、替換或添加 DNA 元件（如限制性位點(diǎn)）以及許多其他需要處理基因序列的技術(shù)。