BD FACSAria Fusion 流式細胞儀

BD FACSAria™ Fusion 流式細胞儀具有的多色性能，操作簡單。早在2003年BD FACSAria™ 問世。如今，其杰出的分選性能和生物安方案結(jié)合。BA FACSAria™ Fusion配備的生物安全柜可以保護實驗樣本以及操作者的安全，而這，也正是生物安全的國際標準。

概述

集安全、高性能、分選于一體

BD FACSAria Fusion所配的生物安全柜嚴格按照Class II Type A2生物安全等級設(shè)計，符合美國國家衛(wèi)生基金會InternationalStandard 49、歐洲European Standard 12469和澳大利亞Australian Standard AS 2252.2–2009等一系列國際生物安全標準。同時，BD FACSAria Fusion還提供不帶生物安全柜的配置，并可以在以后需要的時候很方便的現(xiàn)場升級安裝。

為了進一步提高生物安全防護，BD FACSAria Fusion 采用了諸多雙重保險設(shè)計，將操作者可能受到的暴露風險減少至。例如，在生物安全柜保護操作者免受分選產(chǎn)生的氣溶膠危害的同時，一個內(nèi)置的氣溶膠控制系統(tǒng)（AMS）可以幫助排除氣溶膠，而且AMS與生物安全柜獨立工作，更加提高了生物安全性。

為了達到無以倫比的靈敏度和分辨率，BDFACSAria Fustion設(shè)計了精確集成的液流系統(tǒng)和光學系統(tǒng)，以達到的信號檢測。在多色實驗中，優(yōu)化的光纖引導的激光使每個熒光通道的檢測靈敏度和分辨率得到進一步提升。的流動室技術(shù)和光膠耦合石英杯確保了高性能、高安全性和高簡便性。BD FACSAria Fusion使原本復雜的細胞分選實驗變得很簡單，從而服務(wù)于更多的研究者和應(yīng)用領(lǐng)域。

液流系統(tǒng)

高靈敏度的多色分析和分選應(yīng)用

從穩(wěn)定性流動室技術(shù)到穩(wěn)定性光路設(shè)計，再到軟件操控的儀器設(shè)置和操作， BD FACSAria Fusion實現(xiàn)了簡單高效的細胞分析和分選。

光膠耦合的石英杯流動室

BD FACSAria Fusion的核心是的新一代方形石英杯流動室，它與激光器、光膠耦合的熒光收集光路一起構(gòu)成了一套真正意義的穩(wěn)定性光路系統(tǒng)。BD的石英杯設(shè)計確保激光精確聚焦到樣本流上，不僅能使樣本能獲得的激發(fā)效率，同時還能使發(fā)射光信號得到的收集。

穩(wěn)定性光路不但大大縮短了開機啟動時間，也提高了實驗間以及不同操作者間的可重復性，并且實現(xiàn)了每日質(zhì)控的自動化。更重要的是，它還提高了熒光收集效率并優(yōu)化了分辨率，因此特別適合多色應(yīng)用的需求，甚至在高速分選時同樣具有高靈敏度和分辨率。

此外，BD FACSAria Fusion的新一代流動室設(shè)計進一步提高了側(cè)群細胞 (SP) 應(yīng)用和細胞DNA周期分析實驗的分辨率。

高性能分析，高性能分選

BD FACSAria Fusion的分析性能和熒光檢測靈敏度比肩水平的專業(yè)分析型儀器。這是因為其運用了與BD FACSCanto™、BD FACSVerse™以及BD LSRFortessa™相同的光膠耦合石英杯和穩(wěn)定性的光路結(jié)構(gòu)。

這種流動池和噴嘴的設(shè)計可以達到高數(shù)值孔徑的光信號收集。細胞或顆粒以低速通過分析區(qū)域以便收集更多的光信號，之后包裹著細胞或顆粒的液流在通過噴嘴后加速，從而確保高性能細胞分選的實現(xiàn)。

在傳統(tǒng)的空氣激發(fā)系統(tǒng)中，對顆粒進行分析和分選時的速度是相同的，與之相比，具備了精密配合的光學和液流系統(tǒng)的BD FACS Fusion表現(xiàn)出更*的光學檢測靈敏度。

更好的生物安全保障

穩(wěn)定性光路以及軟件操控的設(shè)計減少了操作者與儀器之間直接接觸的頻率，這也為操作者提供了更好的生物安全保障。

高靈敏檢測弱表達細胞群

BD FACSAria Fusion對于光學系統(tǒng)的不斷改進將熒光檢測靈敏度提高到的水平。專門為優(yōu)化信噪比而選擇的全新激光器進一步提高了對弱表達細胞群的檢測分辨率，確保目標細胞分選時圈門更加便捷、準確。新激光器的優(yōu)異性能使得弱表達細胞群發(fā)出更亮的熒光，從而便于被分析及后續(xù)的圈門分選。

適應(yīng)不同大小顆粒的噴嘴

不同尺寸的噴嘴使用戶可以分選不同大小的樣本顆粒。噴嘴有四種尺寸可選：70μm、85μm、100μm和130μm。噴嘴位于細胞被激光激發(fā)的下方，更換更為方便，安裝位置精確，不會發(fā)生偏差。這意味著在每次插入噴嘴后，可以得到可重復的液滴形態(tài)，不需要重新調(diào)節(jié)儀器設(shè)置，使儀器具有可重復的設(shè)置和校正狀態(tài)。軟件中包括了不同噴嘴的特異分選設(shè)置，使壓力及分選設(shè)置與使用的噴嘴相匹配。

BD FACS™ Accudrop 技術(shù)讓液滴延遲的計算變得簡單

BD FACS Accudrop技術(shù)簡化了跌落延遲測定

BD FACS™ Accudrop技術(shù)幫助用戶查看的下降延遲值。軟件自動化簡化了下降延遲的確定。一旦計算出下降延遲，系統(tǒng)會自動調(diào)整以保持一個恒定的中斷，稱為“點”。自動堵塞檢測停止分揀，并在檢測到堵塞時保護收集管。

經(jīng)過反應(yīng)杯后，氣流加速通過噴嘴，形成液滴進行分選。由于粒子質(zhì)詢發(fā)生在噴嘴上方，因此可以在不重新調(diào)整光學元件或流體流的情況下插入和移除噴嘴。

BD FACSAria Fusion 的4個激光光斑 

方便的鞘液桶和廢液桶

鞘液桶，清洗液桶以及廢液桶都放在系統(tǒng)底部的一個抽屜里，易于操作。抽屜中包括10L不銹鋼鞘液桶和10L容積的廢液桶，鞘液桶可進行高壓。另外，抽屜中還有3個5L的輔助清潔液桶，用于自動無菌分選液路的處理和儀器關(guān)機。

BD FACSAria Fusion可以連接實驗室的空氣過濾和干燥系統(tǒng)，也可以選配壓縮機。

樣本進樣倉

在樣本采集期間，進樣倉被加壓，使樣本進入石英杯檢測流動室。樣本進樣倉的溫度控制和混勻功能都可以用BD FACSDiva™軟件進行調(diào)節(jié)，從而保證長時間分選時細胞的活性，并持續(xù)細胞的懸浮混勻狀態(tài)。該系統(tǒng)提供從1.0 mL的微量管至15 mL的離心管等多種上樣管固定架。進樣端可安裝35 μm和50 μm的樣本濾器，可以在分析和分選過程中避免管路堵塞。

從分選裝置到收集倉

從樣本進樣倉直至分選收集管的封閉管道能夠分離氣溶膠，并且通過液體抽吸裝置抽空分選裝置中的氣溶膠。分選裝置設(shè)計成為固定位置的電偏轉(zhuǎn)板，能夠?qū)毎M行更高效和重復更好的定向偏轉(zhuǎn)，并準確進入特定的分選收集裝置。

分選倉內(nèi)安裝有一個抽吸裝置抽屜，能夠在在分選開始前遮蔽分選收集管，并在Sweet Spot軟件監(jiān)測到堵塞發(fā)生時自動關(guān)閉，以保護樣品收集管和其中的樣品。

分選收集倉的結(jié)構(gòu)設(shè)計使得放入樣品收集管基座變得十分方便。收集管基座的設(shè)計能夠保證收集管的無菌狀態(tài)。你還可以選配一個溫度控制裝置，用以控制樣品收集管或玻片或多孔板的溫度。

方便的無菌設(shè)置和清洗程序

液流系統(tǒng)的創(chuàng)新，如易于插拔的噴嘴，自動化的分選設(shè)置，易于更換的濾膜等，使儀器設(shè)置更為方便和快捷。一體化閥門組合形成了全新的液流管路。軟件向?qū)篃o菌分選設(shè)置更簡便和高效。此外，在樣本運行后，樣本進樣針內(nèi)外都會自動進行沖洗，避免殘留消并除樣本間的交叉污染。

光學系統(tǒng)

更高效率的多色檢測

BD的在光學系統(tǒng)方面的革新設(shè)計能有效的檢測信號，并在多色檢測中極大的提高每個通道的靈敏度和分辨率。增強的靈敏度和分辨率意味著即便信號很弱的細胞群也可以輕易地被識別和分選。

光學系統(tǒng)方便優(yōu)化多色檢測和抗體組合的設(shè)計，以求達到結(jié)果。用戶可以選擇照射樣本細胞的激發(fā)光波長，以及引導散射光和熒光信號通過特定的濾光片到達檢測器的收集光路。激發(fā)光和收集光路上的創(chuàng)新設(shè)計在減小激發(fā)光損失的同時，也顯著改善了信號收集效率，從而使每個樣本都能獲取得到良好的信號。

激發(fā)光路

激發(fā)光路的組成包括：多根引導光纖、固定波長的激光、光束整形裝置和消色差聚焦透鏡。各激光聚焦形成的光斑在空間上相互分離，并各自聚焦成形 (9 x 65 微米)。光斑聚焦越集中，熒光標記的微粒通過激發(fā)點時產(chǎn)生的信號就越強。光膠耦合的熒光透鏡能限度的將發(fā)射光從檢測點傳遞給熒光收集光路。由于光路和樣本流均固定，儀器光路的正交在不同實驗、不同日期間一直保持不變。 手動調(diào)校光路會因為每次調(diào)校狀態(tài)不同而導致實驗結(jié)果有變化。而固定光路設(shè)計避免了這種問題，保證儀器光路穩(wěn)定，對實驗結(jié)果不會有影響。

八角形檢測器中的光傳播路徑

固定光路保證了實驗中不會因光路人為調(diào)整而引入的誤差。

收集光路

光纖將發(fā)射光從光膠耦合石英杯傳遞給檢測器接收裝置。基于八角形和三角形設(shè)計的收集光路，能限度的檢測來自每個激光束照射點的信號，其原理是讓波長最長的光 (光子能力)優(yōu)先透射進入個光電倍增管 (PMT)，并通過一系列的長通二色分光鏡將較短波長的光反射到下一個PMT檢測器。

這一設(shè)計是根據(jù)光反射比光透射更有效率這一原理。熒光信號以反射的形式傳播到每一個PMT檢測器，并在到達檢測器之前只通過2個濾片。因此可以在光信號損失最小的情況下完成熒光檢測。

裝置在每個PMT檢測器之前的帶通濾鏡允許波長范圍內(nèi)的熒光被收集。更重要的是，這種排列簡化了光學陣列中濾鏡和分光鏡，濾光片更易更換，而且不需要任何校準就可達到良好的信號強度。

精密的光學設(shè)計

BD FACSAria Fusion光學系統(tǒng)方面的諸多革新設(shè)計，例如的光膠耦合石英杯、八角形檢測器和9 x 65?m大小的光斑，這些革新設(shè)計協(xié)同工作，以限度提高檢測靈敏度和分辨率。通過精密的設(shè)計產(chǎn)生出這樣一套更高效的光學系統(tǒng)，使得其能夠使用較低功率激光，無需通過單純提高激光器的功率來提升實驗靈敏度和分辨率。而低功率激光又同時可以降低儀器運作的總體費用。

滿足當前及未來需求

對于許多用戶而言，一臺流式的性能高低取決于其靈活性，而靈活性主要表現(xiàn)在能夠同時檢測的參數(shù)數(shù)量。BD FACSAria Fusion 可以支持六根激光器和四個獨立光斑。選擇多達六根不同波長的激光器，并具有同時進行多達20個參數(shù)，18色的檢測能力，有著強大的靈活性。

可升級并向下兼容

用戶可以根據(jù)當前和未來的需求以及預算情況來配置儀器。以后還可以通過升級服務(wù)來增加 BD FACSAria Fusion 的激光器數(shù)量，以提升其能力。

更低的使用成本

與空氣中激發(fā)得分選方式相比，BD FACSAria Fusion高效的光學系統(tǒng)的設(shè)計使得使用成本降低。BD FACSAria Fusion 通過光纖來傳導固體激光器所發(fā)出的激光，從而實現(xiàn)了靈敏度和分辨率的。

小顆粒的分辨率

0.3-µm，0.4-µm，0.5-µm，1.0-µm大小的微球在同一管中用 BD FACSAria Fusion 檢測，四個群體都可以和背景信號清楚地區(qū)分。

CFP轉(zhuǎn)染的Hela細胞

BD FACSAria Fusion 上可以配備445nm激光，它比405nm激光能更有效地激發(fā)CFP蛋白。CFP轉(zhuǎn)染的Hela細胞可以用445nm和405nm的激光激發(fā)，445nm激發(fā)得到的區(qū)分度明顯要高很多。

BD FACSAria III 上收集的實驗數(shù)據(jù)

小鼠骨髓SP細胞

小鼠骨髓來源的細胞用 Hoechst 33342, c-Kit, Sca-1, 和lineage標記，在裝有375nm激光器的 BD FACSAria III上采集數(shù)據(jù)。BD FACSAria Fusion 上同樣可以配備這根激光器。

SP群體 (紅色) 全是c-Kit+ Sca-1++。

使用的抗體是c-Kit PE, Sca-1 PE-Cy™7, Lineage FITC, CD 34 APC, CD45 APC-Cy7, PI，Hoechst Blue, 和 Hoechst Red。

BD FACSAria III 上收集的實驗數(shù)據(jù)

腫瘤細胞株的SP細胞

如散點圖顯示人HT-29結(jié)腸癌細胞使用Hoechst 33342染色，裝有375nm激光器的BD FACSAria III上采集數(shù)據(jù)。BD FACSAria Fusion 上同樣可以配備這根激光器。

作為對照樣本，SP表達被抑制。

BD FACSAria III 上收集的實驗數(shù)據(jù)

控制與分析

與其他BD流式細胞分析儀和分選儀兼容

BD FACSAria Fusion 使用 BD FACSDiva 軟件，對儀器設(shè)置、數(shù)據(jù)獲取和數(shù)據(jù)分析都能夠提供快捷有效的控制。軟件能自動完成儀器的主要設(shè)置過程，限度降低人與儀器的直接接觸所可能帶來的生物安全性的問題。

BD FACSDiva 軟件被廣泛地應(yīng)用于一系列BD的流式細胞分析和分選儀，包括 BD FACSCanto 和 BD LSRFortessa 系統(tǒng)等。研究者的實驗設(shè)計更為靈活方便，可以將優(yōu)化好的實驗條件和設(shè)置快速的轉(zhuǎn)移到另一平臺上。例如，分析實驗的條件和設(shè)置可以輕松應(yīng)用于分選實驗。

分選前的快速簡單準備:
1.打開
2.開啟液流
3.自動化完成儀器設(shè)置、質(zhì)控
     以及液滴延遲優(yōu)化
4.化樣品條件
5. 分選樣本

BD FACSDiva軟件具有儀器設(shè)置和追蹤 (CS&T) 功能，能夠幫助儀器完成基線設(shè)置，優(yōu)化儀器的靈敏度和熒光分辨率。因此，BD FACSDiva能大幅減少由于操作失誤，確保實驗結(jié)果的一致穩(wěn)定。它使得用戶可以在儀器連續(xù)穩(wěn)定的前提下快速完成特定實驗的條件設(shè)置。儀器狀態(tài)追蹤功能會監(jiān)測一系列儀器設(shè)置的數(shù)值，并給出狀態(tài)報告，大大簡化了日常質(zhì)控的流程。Levey-Jennings圖譜可以幫助用戶了解他們的儀器狀態(tài)，確定是否需要進一步的維護處理。

BD CS&T 軟件系統(tǒng)

數(shù)據(jù)獲取和分析

BD FACSDiva軟件使得科研工作者能夠使用自動的數(shù)據(jù)獲取流程，去完成多個數(shù)據(jù)的預覽和保存。軟件還能夠管理數(shù)據(jù)獲取模板、實驗界面設(shè)計、以及補償程序，從而方便數(shù)據(jù)獲取。

為了高效便捷的分析，軟件提供了自動設(shè)門方式、用戶可選的圖形結(jié)構(gòu)和批處理功能。存儲的數(shù)據(jù)可以通過圖形、門、群體層級以及統(tǒng)計結(jié)果，在同一張BD FACSDiva工作表上實現(xiàn)完整分析。通用工作表被保存后，可以用來分析同一實驗中的多個樣本管數(shù)據(jù)，從而大大節(jié)省時間。有助于提高效率的方式還有：用戶自定義的批處理分析、自動化的設(shè)門調(diào)整、在分析不同數(shù)據(jù)間暫停、輸出統(tǒng)計結(jié)果、在進到下一個數(shù)據(jù)文件前打印結(jié)果等等。

索引分選

索引分選使得分選細胞到一個多維收集裝置如96孔板之后，每一個位置上的細胞表型是可以再回溯的。每個細胞落在收集裝置上的位置信息是以X/Y兩維的數(shù)據(jù)形式被保存下來的。因此在分選后，收集裝置上的特定位置的細胞可以追蹤其流式表型信息。

數(shù)字化電子系統(tǒng)

光膠耦合的石英杯流動室和電子處理系統(tǒng)協(xié)同作用可以使每個檢測顆粒的信息。電子采樣速率和顆粒在流動室中的流動速度精確匹配。BD FACSAria Fusion每秒70,000個顆粒的上樣速度下，采集到的數(shù)據(jù)量和上樣速度線性相關(guān)，并且結(jié)果精確。

BD FACSAria Fusion 系統(tǒng)采樣速度

安全防護

BD與Baker共同設(shè)計的安全柜，符合生物安全標準且節(jié)省空間

流式細胞術(shù)生物安全正在成為越來越多的重點實驗室的要求，他們非常關(guān)注操作者偶然暴露在生物樣本中的潛在危險。BD公司于Baker公司合力設(shè)計并建立了一個強大且具有前瞻性的生物安全方案。

在購買BD FACSAria Fusion時，您可以選擇搭配或者不搭配生物安全柜 (BSC)。因為BD FACSAria Fusion與BSC的銜接嚴絲合縫，如果將來需要安裝BSC，現(xiàn)場升級安裝將在一天之內(nèi)完成。

Available without the biosafety cabinet

BD FACSAria Fusion可不選配BSC系統(tǒng)，在日后可快速現(xiàn)場升級安裝。即使BD FACSAria Fusion沒有配備BSC，密閉的上樣至分選的整個通路、液流吸引器、選配的AMS也能降低操作員暴露的危險。

對人員、樣本及環(huán)境的保護

BSC用來保護操作者免受樣本中生物試劑的污染威脅。在與傳染性樣本相關(guān)的實驗室中，BSC是高效、常用的一級屏障設(shè)備中的一員。BSC保護員工和環(huán)境免受有害試劑的傷害，保護樣品 (細胞) 不被污染。

生物安全柜可以控制控制氣流的方向，流量和速度，避免可能有害的顆粒接觸操作著。

生物安全標準認證

Baker公司認證為BD FACSAria Fusion定制的生物安全柜符合二級A2型生物安全柜標準和美國衛(wèi)生設(shè)備基金會 (NSF) 49號國際標準。該生物安全柜同時符合歐洲12469號標準和澳大利亞AS 2252.2–2009號標準。所有的微生物實驗都是在集成系統(tǒng)上進行，以確保與使用狀態(tài)相同

氣流控制

BSC通過控制氣流的方向、體積和流速來引導潛在有害顆粒遠離操作者?？諝饨?jīng)過過濾后循環(huán)流動于工作站表層，安全柜前方的獨立氣流在操作者與工作站之間產(chǎn)生一道保護屏障。

高效微粒過濾器 (HEPA) 能夠去除空氣中的微生物和空氣微粒 (氣溶膠)。HEPA過濾器位于工作區(qū)域的空氣入口和出口處。在安全柜消耗和補充空氣的位置也安裝了HEPA過濾器。安全柜中的HEPA過濾器可排除至少99.97%的熱生成DOP煙塵顆粒或者直徑0.3um以上的顆粒。

BD FACSAria Fusion的氣溶膠處理系統(tǒng)

BD FACSAria Fusion具有一套多重保護控制的氣溶膠處理系統(tǒng)。BD FACSAria Fusion整合的二級A2安全柜確保氣溶膠不外泄，并立即通過HEPA被吸入BSC的過濾器中。

為了更好地處理氣溶膠，獨立的氣溶膠處理系統(tǒng)(AMS) 迅速將分選倉中的氣溶膠吸出，并將所有微粒捕獲于專用的AMS HEPA過濾器中。

另外，氣溶膠處理系統(tǒng)也連接至分選倉區(qū)域。從上樣倉至分選收集管的整個密閉通路都可以分離、捕獲氣溶膠。氣溶膠顆粒將會被液流吸引器吸出，或者被AMS高效抽走。

多重保護正在成為生物安全防護的重要一環(huán)。有了BD FACSAria Fusion，從上樣到分選的整個密閉通路、液流吸引器、二級A2生物安全柜以及氣溶膠控制系統(tǒng)，使氣溶膠控制系統(tǒng)高度盈余。由于這些系統(tǒng)是相互獨立的，使得我們可以逐個測試，保證工作狀態(tài)和保證具有備用保護功能。

多色組合

在BD FACSAria Fusion 流式細胞儀上進行10色CD4、CD8記憶和效應(yīng)細胞與調(diào)節(jié)性T細胞檢測方案。T亞群的檢測分析可以輕松實現(xiàn)。