GelGreen 核酸染料（500μL in water）

GelGreen 核酸染料（500μL in water, 10,000 X）

  GelGreen是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有*設(shè)計的熒光染料。在游離狀態(tài)下，GelGreen發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強。因此，GelGreen的熒光信號強度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān)，可以根據(jù)熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。GelGreen與 EB 有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標準的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用，使用與觀察 EB 相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在 300 nm 紫外光附近可得到*激發(fā)。GelGreen的zui大吸收波長約為518 nm，發(fā)射波長zui大約為605 nm。GelGreen 與雙鏈DNA的親和力非常高，因此可以用做電泳前染色，對分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq 酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。另外，GelGreen與EB相比，誘變能力大大降低。

GelGreenzui初由美國Biotium公司研發(fā)，艾姆斯試驗表明，這種新型染料細胞透過性、誘變性方面表現(xiàn)優(yōu)異，得到市場廣泛認可。

GelGreen 核酸染料（500μL in water）運輸與保存方法

常溫運輸、保存，保質(zhì)期24個月。

GelGreen 核酸染料（500μL in water）使用方法

1．膠染法（用法同EB）

      （1）制膠時加入GelGreen核酸染料（例如：每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelGreen 10,000×儲液，以此比例類推）。

      （2）按照常規(guī)方法進行電泳。

GelGreen 核酸染料（500μL in water）注意事項：

此方法染色染料用量相對較少，500 μL染料大約可以做100塊50 mL的膠。由于GelGreen具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelGreen儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelGreen兼容所有常用的電泳緩沖溶液。含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備，并*保存直到使用。此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。

2．泡染法

      （1）按照常規(guī)方法進行電泳。

      （2）用H2O將GelGreen 10,000×儲液稀釋約3,300倍到0.1 M NaCl中，制成3×染色液。（例如將15μL GelGreen 10,000×儲液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中）。

      （3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中，緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠，室溫振蕩染色30 min左右，*染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時間通常介于30 min到1 h，并隨丙烯酰胺含量增加而長。

注意事項：

1）用泡染法染色時，染料用量較多，單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。3×GelGreen染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。

2）如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關(guān)。

3）如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請嘗試：降低瓊脂糖濃度、延長凝膠時間以保證邊緣清晰、改進上樣技巧或選擇泡染法染色。

3．預(yù)染法（zui省染料的染色方法，按25μL體積上樣，500μL原液理論做20萬個樣品）

       1）該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳

       2）工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的GelGreen 原液稀釋1000倍，即為10 X GelGreen工作液。GelGreen工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。

       3）制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。

       4）樣品染色：向分析樣品中加入GelGreen工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使GelGreen與樣品中DNA充分結(jié)合。GelGreen工作液加入量為總上樣量的1/10，使GelGreen在上樣時的終濃度為1X.

       5）DNA Marker染色：將5μL DNA Marker和1μL GelGreen工作液混勻，室溫放置5分鐘，使GelGreen與DNA充分結(jié)合。

       6）上樣、電泳：按常規(guī)操作。

注意事項：

根據(jù)染料分子量小，帶電荷少的特性開發(fā)本染色方法，按照一塊膠10個樣品計算，500μL原液理論上可以完成2萬塊膠的染色。

疑難解答

1. 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中，GelGreen 可以全部從雙鏈核酸上去掉。

2. 如果想對用 GelGreen 染過的膠進行 Southern blots，建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。

3. 在紫外照射觀察下，與雙鏈 DNA 接合的 GelGreen 呈現(xiàn)紅色熒光。

4. GelGreen對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。

5. GelGreen原液在室溫保存，如放置冰箱保存會產(chǎn)生部分沉淀，使用前適當加熱并搖勻即可正常使用。

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