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Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒

參考價面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 公司名稱上海李記生物科技有限公司
  • 品       牌
  • 型       號C4056L1064
  • 所  在  地上海市
  • 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
  • 更新時間2017/12/18 12:48:00
  • 訪問次數(shù)598
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        上海李記生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售為一體的企業(yè)。李記生物立志做精品,產(chǎn)品涵蓋細胞生物學、分子生物學、動物學等領(lǐng)域,我們的產(chǎn)品都基于*設(shè)計,在保證品質(zhì)的前提下,具有易用、經(jīng)濟、高效的特點。 我們立志做百年企業(yè),打造叫得響的國產(chǎn)品牌。很多我們的產(chǎn)品創(chuàng)意來自于像科研一線的客戶老師,我們提供的不僅是產(chǎn)品,還有一個創(chuàng)新的平臺,我們邀請您一起發(fā)展。 我們是一群有理想、有專業(yè)技能的憤青,我們誓要做響一個品牌,我們是國產(chǎn),我們邀請您一起參與。

李記生物優(yōu)勢產(chǎn)品有:

特級胎牛血清( Foetal Bovine Serum)

特優(yōu)級胎牛血清Foetal Bovine Serum(extra-special)

CCK-8細胞增殖與毒性檢測、

Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細胞培養(yǎng)*)

EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染液

GelRed 核酸染料(500μL in water, 10,000 X)

EZ Protein any KD PAGE蛋白電泳試劑盒

EZ Mark彩色預染蛋白質(zhì)標準

生物試劑
《Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒》是一種廣譜的支原體檢測試劑盒,根據(jù)支原體DNA序列,本試劑盒可以識別所有100多種至今已發(fā)現(xiàn)的支原體??捎糜跈z測所有可能含支原體的樣品,比如:(1)體外細胞培養(yǎng)的上清;(2)血清;(3)各種體液,如唾液、尿液、鼻腔分泌物等;(4)其他液體樣品。
Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒 產(chǎn)品信息

Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

保存

價格(元)

Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒

C4056L1064

100 T

-20℃

1500

產(chǎn)品描述

 Quick Cell PCR法支原體檢測試劑盒》是一種廣譜的支原體檢測試劑盒,根據(jù)支原體DNA序列,本試劑盒可以識別所有100多種至今已發(fā)現(xiàn)的支原體。可用于檢測所有可能含支原體的樣品,比如:(1)體外細胞培養(yǎng)的上清;(2)血清;(3)各種體液,如唾液、尿液、鼻腔分泌物等;(4)其他液體樣品。

試劑盒組成

(1) 支原體引物和內(nèi)參(100次):200 μL

(2) 陽性支原體DNA:50 μL

注意1:本試劑盒提供的支原體引物和內(nèi)參可供至少100次支原體檢測使用。

2:以下試劑需要自己準備:(1)滅菌的去離子水;(2)普通的Taq DNA 聚合酶和相應(yīng)的緩沖液;(3)2.5 mM的dNTP;(4)6× DNA上樣緩沖液。

使用方法

1、待測樣品的準備

為了準確判斷細胞是否有支原體的污染,待測的細胞培養(yǎng)液樣品來源于至少培養(yǎng)3天且匯合度在70-90%左右的細胞培養(yǎng)液上清(貼壁細胞)。懸浮培養(yǎng)的細胞也需要在換液傳代后,至少讓細胞生長3天再取培養(yǎng)液進行檢測。取150 μL上述待測樣品,在普通臺式離心機上1200 rpm (大約150-200 g)離心5 min,取離心后的上清100 μL用于支原體檢測,丟棄下層剩余的50 μL(含細胞沉淀)。收集并已經(jīng)離心去除細胞的待測樣品如果不立即檢測,請放于-20℃或-80℃冰箱保存,不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個月,在-80℃基本可以*保存。

注意:本步驟的低速離心是為了去除哺乳動物細胞,以排除其不必要的干擾。所以離心力要嚴格控制在150-200 g,該離心力下,哺乳動物細胞將被沉淀下來而支原體不會。如果錯誤使用更高的離心力將可能導致支原體也被離心下來,從而導致假陰性。

2、PCR體系的配制。請按下表進行PCR體系(總體積25 μL)配制:

實驗體系

Negative Control

Positive Control

Sample

去離子水

17.5 μL

15.5 μL

15.5 μL

10×Taq DNA 聚合酶緩沖液(含Mg2+)

2.5 μL

2.5 μL

2.5 μL

2.5 mM dNTP

2.5 μL

2.5 μL

2.5 μL

5 Units/μL Taq DNA 聚合酶

0.5 μL

0.5 μL

0.5 μL

支原體引物和內(nèi)參

2 μL

2 μL

2 μL

陽性支原體DNA

-

2 μL

-

待測樣品

-

-

2 μL

3、PCR設(shè)置參數(shù)

1 cycle

94 ℃ for 2 minutes

35 cylses

94 ℃ for 20 seconds

55 ℃ for 20 seconds

72 ℃ for 45 seconds

1 cycle

72 ℃ for 5 minutes

1 cycle

℃ for ∞

4、PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳

(1) 配制1.5% DNA瓊脂糖凝膠。安全起見,建議選用李記生物的GelRe的核酸染料。

(2) 往每個PCR管內(nèi)加入5 μL 6× DNA上樣緩沖液。

(3) 取上述含DNA上樣緩沖液的PCR產(chǎn)物10 μL進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

(4) 當溴酚藍染料跑出3厘米左右時,停止電泳,拍照。

結(jié)果判斷

  PCR擴增的結(jié)果有可能出現(xiàn)以下幾種情況:

 

電泳結(jié)果

電泳結(jié)果

電泳結(jié)果

電泳結(jié)果

電泳結(jié)果

電泳結(jié)果

586 bp內(nèi)參條帶

++

-

+

++

++

-

270 bp左右條帶

-

++++

+++

++

+

-

結(jié)果圖示(見圖1)

泳道1

泳道2

泳道3

泳道4

泳道5

泳道6

支原體污染判斷

陰性

極重度污染

重度污染

中度污染

輕度污染

PCR被抑制

       注:“-”代表沒有條帶;“+”代表有條帶;“+”號越多代表條帶越強。

 

圖1. 支原體PCR擴增結(jié)果。586 bp條帶為內(nèi)參條帶,270 bp左右的條帶為支原體特異條帶(各支原體的條帶大小會略有不同,總體在260-280 bp)。隨著支原體DNA模板的增加,270 bp左右的條帶會逐漸增強而586 bp的內(nèi)參條帶會逐漸減弱,甚至消失。泳道1:陰性對照或者沒有支原體污染的樣品;泳道2:極重度支原體污染樣品;泳道3:重度污染樣品;泳道4:中度污染樣品;泳道5:輕度污染樣品;泳道6:PCR的擴增被細胞的代謝產(chǎn)物抑制,導致擴增失敗。M:DNA marker.

注意事項

1、每次檢測都應(yīng)該設(shè)有陰性對照,作用有:(1)陰性對照會有一條586 bp的內(nèi)參條帶,這樣可以驗證本試劑盒含有的支原體引物和內(nèi)參以及自己準備的Taq DNA 聚合酶,dNTP等試劑沒有問題;(2)只有當陰性對照的結(jié)果沒有出現(xiàn)270 bp左右的支原體特異條帶時,別的樣品的結(jié)果才是可信的。

2、如果586 bp條帶和270 bp左右的條帶都沒有出現(xiàn)(如圖1,泳道6),在排除PCR試劑的問題后(即陰性對照可以正常擴增),說明該樣品含有抑制PCR擴增的代謝產(chǎn)物。有關(guān)PCR的擴增會被細胞的代謝產(chǎn)物抑制的問題,Sigma公司的LookOut Mycoplasma PCR Detection Kit(貨號MP0035)的PCR法支原體檢測試劑盒說明書中也特別提到了這點,說明這是一個PCR法支原體檢測中經(jīng)常遇到的問題,其強烈建議用試劑盒進行DNA提取后再進行鑒定。這也是PCR法支原體檢測的致命弱點。為了克服該問題,以下問題必須注意:(1)您購買的PCR法支原體檢測試劑盒,其擴增產(chǎn)物中必須含有內(nèi)參(Internal Contol)條帶作為對照【本試劑盒的586 bp條帶就是內(nèi)參條帶】。否則,如果沒有內(nèi)參作為對照,即使樣品擴增后沒有支原體特異條帶,你也無法確定是因為樣品確實沒有支原體還是因為PCR被細胞的代謝產(chǎn)物抑制導致的假陰性。(2)如果出現(xiàn)PCR的擴增被細胞的代謝產(chǎn)物抑制時,請使用血液基因組DNA抽提試劑盒,抽提支原體DNA后再進行PCR鑒定。(3)同時使用本公司生產(chǎn)的《Quick Cell支原體快速檢測試劑盒》進行檢測,經(jīng)嚴格測試,該試劑盒的擴增不會被細胞的代謝產(chǎn)物抑制。

3、根據(jù)支原體DNA的序列,本試劑盒可以識別所有100多種至今已發(fā)現(xiàn)的支原體,具有廣譜的識別能力。

4、如發(fā)現(xiàn)細胞被支原體污染,本公司提供細胞支原體清除和預防試劑。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

保存

價格(元)

Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細胞培養(yǎng))

C4056L1060

50 T

-20℃

1350

Quick Cell 發(fā)光法支原體檢測試劑盒

C4056L1062

50 T

-20℃

1690

C4056L1064

100 T

-20℃

1500

Quick Cell支原體去除/預防試劑盒

C4056L1066

2ml

-20℃

1200

 

 

    關(guān)鍵詞:臺式離心機
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