人P選擇素（P-Selectin/CD62P）ELISA檢測試劑盒說明書

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中文名：人P選擇素(P-selectin/CD62P)ELISA試劑盒
別名：人P選擇素(P-selectin/CD62P)ELISA Kit
貨號：fk-m0067
供應商：上海樊克
規(guī)格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6個月
ELISA試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨供應。
使用范圍：僅供科研使用，不得用于臨床。
產品用途：用于測定血清、血漿、組織及相關液體樣本中的含量或活性。
待檢樣本：體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等等。
原理：ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
ELISA試劑盒檢測類型：雙抗體夾心法測抗原、雙抗原夾心法測抗體、間接法測抗體、競爭法測抗體、競爭法測抗原、捕獲包被法測抗體、ABS-ELISA法。



人P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA檢測試劑盒說明書注意事項：
1.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
2.試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
3.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
4.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
5.洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
6.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
7.加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
8.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
9.底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

人P選擇素(P-selectin/CD62P)ELISA檢測試劑盒液體類標本： 
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1）血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2）血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5）組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。


【操作步驟】：
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，依次進行稀釋數倍。
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍（48T 的20 倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算結果：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
人P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。
2.批內與批見應分別小于9%和11%

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