豬口蹄疫間接血凝檢測試劑
O型口蹄疫正向間接血凝抗原使用說明書
臨床意義
口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）又稱口瘡熱，是由口蹄疫病毒引起的主要侵害偶蹄動(dòng)物的急性、熱性、高度接觸性傳染病。檢測特異性口蹄疫抗體可作為該病疫苗免疫狀況及輔助診斷指標(biāo)。
試劑組成
1. 間接血凝診斷抗原 | 1瓶; |
| 2. 稀釋液 | 1瓶; |
3. 陰性對照 | 1支; |
| 4. 陽性對照 | 1支； |
5. 使用說明書 | 1份; |
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操作程序
1. 待檢血清(每頭約0.5ml血清即可)56℃水浴滅活30分鐘。
2. 在血凝板上1-6排的1-9孔；第7排的1-3孔第5-6孔；第8排的1-12孔各加稀釋液30微升。
3. 取1號待檢血清30微升加入第1排第1孔，并將塑咀插入孔底，右手姆指輕壓彈簧1-2次混勻（避免產(chǎn)生過多的氣泡)，從該孔取出30微升移入第2孔，混勻后取出30微升移入第3孔……直至第9孔混勻后取出30微升丟棄。此時(shí)第1排1-9孔待檢血清的稀釋度(稀釋倍數(shù))依次為：1：2(1)1：4(2)1：8(3)1：16(4)1：32(5)1：64(6)1：128(7)1：256(8)1：512(9)。取2號待檢血清加入第2排：取3號待檢血清加入第3排……均按上法稀釋，注意！每取一份血清時(shí)，必須更換塑咀一個(gè)。
4. 在血凝板的第7排第1孔加陰性血清30微升、對倍稀釋至第3孔，混勻后從該孔取出30微升丟棄。此時(shí)陰性血清的稀釋倍數(shù)依次為1：2(1)1：4(2)1：8(3)。第5-6孔為稀釋液對照。
5. 在血凝板的第8排第l孔加陽性血清30微升，對倍稀釋至第12孔，混勻后從該孔取出30微升丟棄。此時(shí)陽性血清的稀釋倍數(shù)依次為1：2-1：4096。
6. 被檢血清各孔、陰性對照血清各孔、陽性對照各孔、稀釋液對照孔均各加血凝抗原（充分搖勻，瓶底應(yīng)無血球沉淀）30微升。
7. 將血凝板置于微量振蕩器上振蕩1-2分鐘，如無振蕩器，用手輕輕搖勻亦可，然后將血凝板放在白紙上觀察各孔紅血球是否混勻，不出現(xiàn)血球沉淀為合格。蓋上玻板，37℃下靜置1-1.5小時(shí)或常溫下3小時(shí)左右判定結(jié)果，也可延至翌日判定。
結(jié)果判斷
1. 對照試驗(yàn)：應(yīng)在對照試驗(yàn)結(jié)果有效的前提下，來判定待檢血清樣本的結(jié)果。
陰性對照血清1：8孔，稀釋液對照孔，均應(yīng)無凝集(血球全部沉入孔底形成邊緣整齊的小圓點(diǎn))，或僅出現(xiàn)“+”凝集(血球大部沉于孔底，邊緣稍有少量血球懸浮)。
陽性血清對照1：2–l：256各孔應(yīng)出現(xiàn)“++～++++”凝集為合格，(少量血球沉入孔底，大部血球懸浮于孔內(nèi))。
2. 待檢血清：以呈現(xiàn)“++”凝集的zui大稀釋倍數(shù)為該份血清的抗體效價(jià)。例如1號待檢血清l-5孔呈現(xiàn)“++ ～++++”凝集，6-7孔呈現(xiàn)“++”凝集，第8孔呈現(xiàn)“+”凝集，第9孔無凝集，那么就可判定該份血清的口蹄疫抗體效價(jià)為1：128。
3. 抗體效價(jià)與抗感染的關(guān)系：接種口蹄疫疫苗的豬群免疫抗體效價(jià)達(dá)到1：128以上,牛群、羊群免疫抗體效價(jià)達(dá)到1：256以上為免疫合格。
注意事項(xiàng)
1.液體血凝抗原4-8℃保存(切勿凍結(jié))，有效期4個(gè)月；陰陽性對照血清；-15～-20℃保存，有效期1年。
2. 嚴(yán)重溶血或嚴(yán)重污染的血清樣品不宜檢測，以免發(fā)生非特異性反應(yīng)。
3. 勿用90°和130°血凝扳，嚴(yán)禁使用一次性血凝板，以免誤判結(jié)果。
4. 本法可單獨(dú)檢測口蹄疫抗體水平，也可同步檢測口蹄疫免疫抗體水平，豬水泡病免疫抗體水平。
5. 用過的血凝板應(yīng)及時(shí)在水下沖盡血球。再用蒸餾水或去離子水沖洗2次，甩干水份放37℃恒溫箱內(nèi)干燥備用。檢測用具應(yīng)煮沸消毒，37℃干燥備用。血凝板太臟，可浸泡在5％鹽酸液內(nèi)，48小時(shí)撈出后清水沖凈。
6. 每次檢測只做一份陰性、陽性和稀釋液對照。
“-”表示*不凝集成0–10%血球凝集。
“+”表示10-25％血球凝集“+++”表示75%血球凝集。
“++”表示50%血球凝集“++++”表示90-*血球凝集。
7. 用不同批次的血凝抗原檢測同一份血清時(shí)，應(yīng)事先用陽性血清準(zhǔn)確測定各批次血凝抗原的效價(jià)，取抗原效價(jià)相同或相近的血凝抗原檢測待檢血清抗體水平的結(jié)果是基本*的，如果血凝抗原效價(jià)差別很大用來檢測同一血清樣品，肯定會出現(xiàn)檢測結(jié)果不*。
8. 收到本試劑盒時(shí)，應(yīng)立即打開包裝，取出血凝抗原瓶，用力搖動(dòng)，使粘附在瓶蓋上的紅細(xì)胞搖下，否則易出現(xiàn)沉渣，影響使用效果。
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