圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)試劑盒
豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
【原理】
豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus ,PCV)是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的引起仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥的必需病原。PCV2具有致病性，主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥，還可引起豬皮炎和腎病綜合癥、間質(zhì)性肺炎和繁殖障礙等。主要感染斷奶仔豬，以發(fā)熱、漸進(jìn)性消瘦、呼吸困難和黃疸等癥狀為特征，死亡率5％－30％，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。檢測(cè)特異性豬圓環(huán)病毒抗體，可作為豬場(chǎng)圓環(huán)病疫苗的免疫監(jiān)測(cè)及該病輔助檢測(cè)指標(biāo)。
本試劑盒采用ELISA方法檢測(cè)豬血清中特異性抗圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體。本試劑靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，操作方便快速，可分多次使用。
【試劑組成】
1.預(yù)包被板 | 48T/96T; |
| 7. 終止液(6號(hào)液) | 1支; |
2.酶結(jié)合物(1號(hào)液) | 1支; |
| 8. 陽(yáng)性對(duì)照品 | 1支; |
3.濃縮洗滌液(2號(hào)液) | 1支; |
| 9. 陰性對(duì)照品 | 1支; |
4.底物(3號(hào)液) | 1支; |
| 10.不干膠膜 | 1/2片; |
5.顯色劑(4號(hào)液) | 1支; |
| 11.自封袋 | 1個(gè); |
6.樣本稀釋液(5號(hào)液) | 1支; |
| 12.使用說(shuō)明書(shū) | 1份; |
【操作程序】
1．洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號(hào)液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。
2．樣本稀釋 用樣本稀釋液(5號(hào)液)將待檢血清樣本按1：40稀釋，如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液，混勻。陰性、陽(yáng)性對(duì)照品不用稀釋，直接加樣。
3． 加樣反應(yīng) 每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔(分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘后再甩凈，拍干。
4．加酶反應(yīng) 除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物(1號(hào)液) 1滴。37℃避光反應(yīng)30分鐘后，甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。
5．顯色反應(yīng) 加底物液(3號(hào)液)和顯色劑(4號(hào)液)各1滴，混勻，37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號(hào)液)1滴，終止反應(yīng)（加終止液后，藍(lán)色會(huì)變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果。
【結(jié)果判斷】
陰性對(duì)照呈無(wú)色或淺黃色，陽(yáng)性對(duì)照呈明顯黃色，表示試驗(yàn)有效。
以空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度（A值）。待檢孔A值大于陰性對(duì)照A值平均值的2.1倍者判為陽(yáng)性。如陰性對(duì)照A值的平均值低于0.08時(shí)按0.08計(jì)算。
【注意事項(xiàng)】
1.試劑盒于2-8℃保存，有效期12個(gè)月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。
2.未使用完的板條應(yīng)密封保存。
3.試劑盒中終止液具有腐蝕性，要小心使用。
4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。
5.試驗(yàn)樣本應(yīng)為無(wú)染菌、無(wú)血脂、無(wú)溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。
6. 37℃孵育時(shí)，建議使用水浴箱。如無(wú)條件，可在溫箱中放置濕盒進(jìn)行反應(yīng)并同時(shí)用不干膠膜封蓋板孔。
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