Elisa試劑盒檢測原理
2021-01-20標(biāo)簽:檢測, 樣本, 標(biāo)準(zhǔn)
Elisa生物檢測是一種敏感度高,同時特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)檢測方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
四種Elisa檢測方法由于其檢測原理各有優(yōu)劣:
優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)直接法1.操作簡便2.消除了二抗交叉反應(yīng)1.一抗由于添加標(biāo)簽免疫活性降低2.標(biāo)記一抗耗時且昂貴3.沒有產(chǎn)生信號放大間接法1. 一抗的最大免疫反應(yīng)性得以保留2. 高靈敏度,信號放大1. 二級抗體可能發(fā)生交叉反應(yīng),產(chǎn)生非特異性信號2. 需要額外的孵育步驟夾心法1.特異性,靈敏度高2.適合復(fù)雜的樣本1.檢測時間,反應(yīng)時間增加2.步驟繁瑣競爭法1. 通過觀察預(yù)期信號輸出中的干擾來測量樣本中抗原(或抗體)的濃度。2. 最常用于分析物較小,不能同時跟兩種不同的抗體結(jié)合。1.計算不太直觀2.總體敏感性和特異性較低。
Elisa試劑盒選擇原則:
指標(biāo)選項(xiàng)樣本類型人,小鼠,大鼠檢測指標(biāo)的類別·多表位的大蛋白:夾心ELISA·小分子:競爭ELISA檢測需求定性或定量靈敏度低濃度的物質(zhì)需選擇高靈敏度檢測方式樣本體積珍貴的樣本用少量的體積回收率和線性·靈敏度·動態(tài)范圍·標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測系統(tǒng)比色法,熒光法,發(fā)光法其他優(yōu)勢協(xié)議簡單,操作方便,實(shí)驗(yàn)時間短
Elisa試劑盒評價標(biāo)準(zhǔn):
① 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,應(yīng)大于等于0.9900。
② 靈敏度:反應(yīng)試劑盒的最低檢測濃度
③ 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
④ 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)
⑤ 回收率:判斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和特異性
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