當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>光合作用系列>> AS6321397原果膠含量測試盒(比色法)
產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 規(guī)格 | 100管/48樣、50管/24樣 |
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級別 | 其他 |
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321397 | 原果膠含量測試盒(比色法) | 100管/48樣 |
AS6321397 | 原果膠含量測試盒(比色法) | 50管/24樣 |
測定意義
果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一,分為水溶性果膠和不溶性果膠,即原果膠。因其具有良好的乳化、增稠和凝膠作用,在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用。
測定原理
原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠,并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸,產(chǎn)物在強(qiáng)酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物,在530 nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
天平、研缽、常溫離心機(jī)、水浴鍋、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體100mL×2瓶,4℃保存。
提取液二:液體100mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,4℃保存。
試劑一:濃硫酸,自備。
試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑三:液體3mL×1瓶,4℃避光保存。
樣品處理
將組織樣品搗碎,按照樣品質(zhì)量(g)和提取液一體積(mL)為1: 20的比列(建議取約0.05g樣品,加入1mL提取液一),置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min,取出冷卻后于5000g、 25℃離心10min,去掉上清,沉淀中再加入1mL提取液一重復(fù)操作一次,離心后去上清,沉淀中加入1mL提取液二,置于90℃恒溫水浴鍋中水解1h,取出冷卻后于8000g、25℃離心15min,取上清液待測。
測定操作表
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對照管 | 測定管 | |||||
樣本(μL) | 30 | 30 | ||||||
標(biāo)準(zhǔn)品(μL) | 30 | |||||||
濃硫酸(μL) | 180 | 180 | 180 | 180 | ||||
混勻、90℃水浴10min,取出后冷卻 | ||||||||
試劑二(μL) | 30 | |||||||
試劑三(μL) | 30 | 30 | 30 | |||||
混勻,25℃靜置30min | ||||||||
蒸餾水(μL) | 90 | 60 | 60 | 60 | ||||
充分混勻,取200μL置于微量石英比色皿/96孔板中,測定530nm處吸光值,分別記為A1、A2、A3和A4?!鰽1=A2-A1,△A2=A4-A3 |
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
計算公式
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) = 0.25×△A2÷△A1÷W
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)品濃度,0.25mg/mL;V標(biāo):反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.02mL; V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本鮮重,g。
用96孔板測定的計算公式如下
原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) =0.25×△A2÷△A1÷W
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)品濃度,0.25mg/mL;V標(biāo):反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.02mL; V樣總:加入提取液體積,1mL; W:樣本鮮重,g。
注意事項
濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性,操作時需特別注意,90℃加熱取出后冷卻再打開蓋子,以防液體飛濺燒傷。
若吸光值超過1,可將樣本提取液進(jìn)行適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
檢出限為10μg/g。
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