引言
對于貼壁依賴性細(xì)胞，微載體可為其繁殖和生長提供較大的表面積。由于特定的細(xì)胞類型對附著和鋪展有其特有的要求，因此應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)選擇最佳的微載體。使用多種微載體類型進(jìn)行小規(guī)模研究極為實(shí)用且必要，可以確定適用于該應(yīng)用的最佳微載體，并能幫助在開發(fā)過程中更大程度節(jié)省成本。
Vero細(xì)胞是一種貼壁依賴性細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于病毒疫苗生產(chǎn)平臺。今天我們將為大家以一則應(yīng)用分享：LeProlif®? Sphere球狀微載體培養(yǎng)Vero細(xì)胞生產(chǎn)疫苗的巨大潛力。
研究過程：在2L和10L的LePhinix®? EZG臺式生物反應(yīng)器中無菌接入LeProlif®? Sphere球狀微載體培養(yǎng)Vero細(xì)胞，通過反應(yīng)器控制工藝流程，采用批次培養(yǎng)模式培養(yǎng)細(xì)胞，并觀察最終細(xì)胞增殖及放大培養(yǎng)效果。
材料&方法
本次研究主要采用的耗材&設(shè)備
LeProlif®? Sphere球狀微載體
LeProlif®? Sphere球狀微載體是一種用于高產(chǎn)量培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的微球狀載體，為動(dòng)物細(xì)胞的生長提供了適宜的表面，并可用于懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中。還可用于增加單層細(xì)胞培養(yǎng)容器(例如培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)瓶)及灌流室中的細(xì)胞產(chǎn)量。
• 以交聯(lián)葡聚糖為基底
• 貼壁面積約為4400cm2/g
• 特殊的材料表面改性工藝提高細(xì)胞貼壁率及均勻度，支持高密度灌流培養(yǎng)
• 可在臺式生物反應(yīng)器/一次性生物反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，方便放大
• 可將細(xì)胞從微球表面消化下來進(jìn)行收貨
LePhinix®? EZG臺式生物反應(yīng)器
• 球狀載體濕熱滅菌后通過接管機(jī)無菌焊接后接入反應(yīng)器內(nèi)
• 可搭配不銹鋼篩網(wǎng)進(jìn)行灌流培養(yǎng)，將微載體截留在罐內(nèi)進(jìn)行換液操作或者收獲細(xì)胞
• 工作體積：1 L - 10 L
• 1 個(gè) 10 L 臺式生物反應(yīng)器最高可培養(yǎng) 10 L ，載體濃度為3g/L，提供的細(xì)胞貼壁面積達(dá)到了132000cm2
研究步驟
01. 接種
種子細(xì)胞在T-flask里培養(yǎng)制備，最終接進(jìn)2L的LePhinix®? EZG臺式生物反應(yīng)器中。
02. 細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)置及放大
我們在2L的LePhinix®? EZG臺式生物反應(yīng)器中無菌接入LeProlif®? Sphere球狀微載體，針對Vero細(xì)胞在球狀微載體上的生長進(jìn)行測試，以掌握Vero細(xì)胞在臺式生物反應(yīng)器內(nèi)的增殖特性，再通過球轉(zhuǎn)球進(jìn)一步放大至10L臺式生物反應(yīng)器中，為Vero細(xì)胞在生產(chǎn)逐步放大中的工藝應(yīng)用提供了相應(yīng)的參考。
研究結(jié)果
3g/L的載體濃度，1.2E5/mL的細(xì)胞接種密度，培養(yǎng)4天，從1.5L球轉(zhuǎn)球放大至4L，再球轉(zhuǎn)球放大至10L，細(xì)胞密度可擴(kuò)增約12倍左右，活率均維持在90%以上，在玻璃罐內(nèi)不同放大規(guī)模中表現(xiàn)出高度的一致性，球轉(zhuǎn)球效果較好，見圖1、圖2和圖3。
圖1 Vero細(xì)胞球轉(zhuǎn)球放大活細(xì)胞密度
圖2 Vero細(xì)胞球轉(zhuǎn)球放大細(xì)胞活率
球轉(zhuǎn)球前
球上細(xì)胞消化
球轉(zhuǎn)球后
圖3 球轉(zhuǎn)球過程中Vero細(xì)胞在微載體上的貼壁情況
研究結(jié)論
3g/L的載體濃度下，Vero細(xì)胞在罐內(nèi)培養(yǎng)至第4天達(dá)到了1.4×106 cells/mL左右的細(xì)胞密度，為了保證球轉(zhuǎn)球放大的成功率，1.4×106cells/mL的細(xì)胞密度并非是最高值，且可以通過提高載體濃度來提高最終的細(xì)胞密度。
在LePhinix®? EZG臺式生物反應(yīng)器中，LeProlif®? Sphere球狀微載體具備能有效實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)逐步放大工藝的能力。
樣品申領(lǐng)活動(dòng)進(jìn)行中
如需申請?jiān)囉醚b或咨詢產(chǎn)品，可以長按識別/掃描下方二維碼即可申領(lǐng)試用。
也可長按識別/掃描下方二維碼，添加產(chǎn)品專員，為您提供專屬服務(wù)。
會(huì)員1.png)
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)