小鼠支原體ELISA測(cè)定試劑盒
規(guī)格:48T/96T定量定性檢測(cè)
elisa試劑盒,多種種屬elisa試劑盒:動(dòng)物(人elisa試劑盒,牛elisa試劑盒,犬elisa試劑盒,猴elisa試劑盒,大小鼠elisa試劑盒,兔elisa試劑盒,雞elisa試劑盒,豚鼠elisa試劑盒,倉(cāng)鼠elisa試劑盒,豚鼠elisa試劑盒,裸鼠elisa試劑盒)elisa試劑盒,植物elisa試劑盒。
小鼠支原體ELISA測(cè)定試劑盒 組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為1,600 pg/ml,將其稀釋為400 pg/ml后,再做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別稀釋成400 pg/ml,200 pg/ml,100 pg/ml,50 pg/ml,25 pg/ml,12.5 pg/ml,6.25 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制200 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 400 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml。
4. 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5. 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
6. 檢測(cè)溶液A:1×120μl(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100μl/孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測(cè)溶液A加990μl檢測(cè)稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
7. 檢測(cè)溶液B:1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11. 覆膜:5張
12. 使用說(shuō)明書(shū):1份
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酶標(biāo)儀判讀結(jié)果
◎顯色反應(yīng)終止后應(yīng)立刻比色(30分鐘內(nèi))。
常見(jiàn)的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種,以后者zui為常見(jiàn),而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色,測(cè)定波長(zhǎng)為490nm;
TMB終止后顯黃色,測(cè)定波長(zhǎng)為450nm,
二種底物的校正波長(zhǎng)均用630nm。
使用雙波長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。同時(shí)要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色,否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片。
報(bào)告方式
◎定性試驗(yàn) 國(guó)內(nèi)外為便于統(tǒng)一計(jì)算,一律按S/C.O方式報(bào)告,S為標(biāo)本A值,C.O即Cut Off值(陽(yáng)性判定值)
◎夾心法和間接法以S/C.O≥1為陽(yáng)性;
竟?fàn)幏ㄅc中和法以S/C.O﹤1為陽(yáng)性
◎Cut Off的計(jì)算公式以試劑盒說(shuō)明書(shū)的為準(zhǔn)常見(jiàn)的有:
◎A) C.O=2.1×N(當(dāng)N不足0.05時(shí)按0.05計(jì)),
◎此公式由P/N>2.1換算而來(lái),常用于夾心法。
◎B) C.O=0.5×N,從抑止率公式換算而來(lái),
◎常用于竟?fàn)?,中和?br />◎C) C.O=N+C(C為常數(shù)),用于間接法。
◎D) C.O=C×P+N(C為常數(shù)),用于間接法。此公式zui客觀,但對(duì)生產(chǎn)廠家要求很高,陰陽(yáng)性對(duì)照測(cè)定值要基本恒定。
報(bào)告方式
定量分析 用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋,ELISA測(cè)定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以量或單位表示。
ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測(cè)標(biāo)本做在同一塊板上。
◎現(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線,要得到精確的結(jié)果實(shí)屬不易。
因此嚴(yán)禁用定性試劑盒做定量分析。
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