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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
AS6321151 | 甲基檸檬酸合酶(MCS）測(cè)試盒（比色法） | 100管/96樣 |
AS6321151 | 甲基檸檬酸合酶(MCS）測(cè)試盒（比色法） | 50管/48樣 |
AS6321151 | 甲基檸檬酸合酶(MCS）測(cè)試盒（比色法） | 25管/24樣 |
AS6321151 | 甲基檸檬酸合酶(MCS）測(cè)試盒（比色法） | 10管/9樣 |
MCS廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中，與檸檬酸合酶（CS）共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)。
測(cè)定原理：
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰，進(jìn)一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸；該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存，臨用前加入1mL蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
稱(chēng)取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
將勻漿600g，4℃離心5min。
棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CS（此步可選做）。
在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體CS測(cè)定。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定
（1）在試劑五中加入1mL無(wú)水乙醇和22mL試劑四，混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、220μL試劑五和10μL試劑六，混勻，記錄412nm處20秒時(shí)的初始吸光度A1和2分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
MCS活性計(jì)算：
使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
MCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=880×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
MCS（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T=177.8×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
MCS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.3556×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.4×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
MCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1760×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
MCS（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=355.6×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個(gè)酶活力單位。
MCS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.711×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.4×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
配方
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存；（50mM Tris-HCl 7.4，8.56g 蔗糖，88mg EDTA）
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；(10mM Tris-HCl 7.4，1％Trixton-100)
試劑三：液體1.5mL×1支，4℃保存；(100mM PMSF)
試劑四：液體×1瓶，4℃保存；（稱(chēng)0.135g Tris，0.166g KCl，8.4mgEDTA，溶于27.5mL雙蒸水，用HCl調(diào)pH至7.5）
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存；（稱(chēng)取2mg DTNB，2mg 丙二酰CoA于30mL試劑瓶）
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；（稱(chēng)取0.6mg草酰乙酸于1.5mLEP管）
公司正在出售的產(chǎn)品：
LDL ELISA Kit | B細(xì)胞κ輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子εELISA試劑盒 |
Anti-Ribosomal P Protein Antibody(ARPA)ELISA Kit | Cullin2蛋白ELISA試劑盒 |
Clarin1蛋白ELISA試劑盒 | EB病毒核抗原3A抗體ELISA試劑盒 |
Desmuslin蛋白ELISA試劑盒 | I |
大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
甲胎蛋白異質(zhì)體L3ELISA試劑盒 | 人腫瘤壞死因子γ(TNFγ)ELISA試劑盒 |
人suan性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)試劑盒ELISA | Fritz蛋白ELISA試劑盒 |
雞透明質(zhì)suan(HA)檢測(cè)試劑盒elisa | 黃熱病病毒疫苗株17D RT-PCR試劑盒 |
灰馬杜拉分枝菌PCR試劑盒 | 斯氏分枝桿菌PCR試劑盒 |
布尼亞維拉病毒RT-PCR試劑盒 | 山羊分枝桿菌PCR試劑盒 |
副牛痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 黃熱病病毒疫苗株17D RT-PCR試劑盒 |
文氏密螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒 | CC16 大鼠克拉拉細(xì)胞蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒 |
B淋巴細(xì)胞抗原(CD20)ELISA試劑盒 | 黃熱病毒（YFV）核suan檢測(cè)試劑盒 |
B因子(BF)ELISA試劑盒 | 睡眠嗜血桿菌PCR試劑盒 |
血小板衍生生長(zhǎng)因子受體α(PDGFRα)ELISA試劑盒 | BNP 豬腦鈉su/腦鈉尿肽ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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