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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321354 | 漆酶測試盒（比色法） | 100管/48樣 |
AS6321354 | 漆酶測試盒（比色法） | 50管/24樣 |
測定意義
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強(qiáng)的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。
測定原理
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計(jì)算得漆酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存。
工作液：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨用前加15mL試劑一溶解；用不完的試劑4℃保存一周。
酶液提取
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心30min，取上清，置冰上待測。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
細(xì)胞培養(yǎng)液：直接檢測。
測定操作表
對照管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 45 | 45 |
試劑一（μL） | 255 | |
工作液（μL） | 255 | |
60℃水浴20min后冷卻至室溫，取200μL反應(yīng)液于微量石英比色皿/96孔板中測定420nm處吸光值A(chǔ)，△A=A測定管-A對照管 | ||
注意：
極少數(shù)樣本在60℃水浴20min后會(huì)出現(xiàn)沉淀，可經(jīng)過8000g 25℃離心10min后，取上清檢測，例如成熟的水稻葉片樣本。
為確保檢測準(zhǔn)確性，若ΔA大于1，將樣本用提取液稀釋2~10倍后重新檢測，計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
酶活性計(jì)算公式
a．用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /104 cell）= ×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= ×V反總÷V樣÷T= 9260×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min
b. 用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18.52×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 18.52×△A÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /104 cell）= ×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 18.52×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= ×V反總÷V樣÷T= 18520×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.045mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min
公司正在出售的產(chǎn)品：
LTB ELISA Kit | Girdin蛋白ELISA試劑盒 |
Ashwin(Ash)ELISA Kit | L-天冬氨suan脫氫meiELISA試劑盒 |
Juxtanodin蛋白ELISA試劑盒 | Neurotrimin蛋白ELISA試劑盒 |
NADH脫氫mei2ELISA試劑盒 | PL7抗體/抗蘇氨酰tRNA合成meiELISA試劑盒 |
大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)試劑盒 ELISA | 大鼠磷suan化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激mei(pERK)ELISA試劑盒 |
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馬胃葡萄球菌PCR檢測試劑盒 | 京大戟探針法PCR鑒定試劑盒 |
萬古霉su耐藥基因PCR測定試劑盒 | IL-3 大鼠白介su3ELISA檢測試劑盒 |
CETP 兔子膽gu醇酯轉(zhuǎn)移蛋白ELISA檢測試劑盒 | 坎氏弧菌PCR試劑盒 |
cecropin 人殺菌肽ELISA檢測試劑盒 | 溶酪巨球菌PCR檢測試劑盒 |
腺肽α1(Thymosin α1)ELISA試劑盒 | CD5抗原樣蛋白(CD5L)ELISA試劑盒 |
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