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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321400 | 果膠酶測試盒（比色法） | 100管/48樣 |
AS6321400 | 果膠酶測試盒（比色法） | 50管/24樣 |
測定意義
果膠酶（pectinase）是一類分解果膠質(zhì)酶類的總稱，包括原果膠酶，果膠酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于植物果實(shí)和微生物中，主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
測定原理
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，測定540nm處吸光值變化可計(jì)算得果膠酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前加入7.5mL試劑一，50℃加熱溶解，用不完的試劑4℃保存一周。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。
酶液提取
1．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2．細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)液等：直接檢測。
測定操作表
對照管 | 測定管 | |
試劑二（µL） | 120 | 120 |
50℃水浴溫育5min | ||
樣本（µL） | 30 | |
煮沸樣本（µL） | 30 | |
混勻，50℃水浴反應(yīng)30min | ||
試劑三（µL） | 150 | 150 |
沸水浴5min，冰浴冷卻終止反應(yīng)，8000g，4℃，離心10min，蒸餾水調(diào)零，取上清于微量石英比色皿或96孔板測定540nm處吸光值A(chǔ)，△A=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。 | ||
酶活性計(jì)算公式
用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/mL；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每104細(xì)胞每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量
4．細(xì)胞培養(yǎng)液
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h
用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/mL；y為吸光值。
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠產(chǎn)。生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每104細(xì)胞每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量
4．細(xì)胞培養(yǎng)液
酶活性定義：在50℃，pH3.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。
果膠酶活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷V樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h
注意事項(xiàng)
試劑二若有沉淀析出，請置于50℃加熱溶解。
測定之前請先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果吸光值較高或較低，請用提取液做適當(dāng)?shù)南♂尰蛘呒哟髽颖玖?，并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)或者以實(shí)際加入的樣本體積參與計(jì)算。
煮沸樣本建議在沸水中煮沸10分鐘，以將酶滅活。
公司正在出售的產(chǎn)品：
HSV-Ag1 ELISA Kit | Hyccin蛋白ELISA試劑盒 |
Atlastin 1(ATL1)ELISA Kit | NADP依賴性蘋果mei2ELISA試劑盒 |
MAX交互子1ELISA試劑盒 | N-去乙?；痬ei/磺基轉(zhuǎn)移mei4ELISA試劑盒 |
Notch2氨基端樣蛋白ELISA試劑盒 | RET原癌基因ELISA試劑盒 |
雞白介su18(IL-18) ELISA試劑盒 | 大鼠凝血mei受體(TR)試劑盒 ELISA |
中性粒細(xì)胞抗體ELISA試劑盒 | 人突觸回蛋白2(SYNJ2)試劑盒ELISA |
人抗胃壁細(xì)胞抗體(AGPA/PCA)檢測試劑盒elisa | Pannexin1蛋白ELISA試劑盒 |
人性別決定區(qū)Y蛋白(SRY)ELISA試劑盒 | 馬齒莧染料法PCR鑒定試劑盒 |
口腔支原體PCR試劑盒 | 人乳頭瘤病毒高危型PCR檢測試劑盒 |
戊型肝炎病毒RT-PCR試劑盒 | 人免疫缺陷病毒1型M群G型RT-PCR試劑盒 |
豬皰疹病毒型PCR檢測試劑盒 | 柯拉松血吸蟲PCR試劑盒 |
貓弓形蟲PCR檢測試劑盒 | IL-1β 大鼠白介su1β ELISA檢測試劑盒 |
CK-HMW 人高分子量細(xì)胞角蛋白ELISA檢測試劑盒 | 口蹄疫O型/A型/Asia型(FMDV-O/-A/-Asia)核suan檢測試劑盒 |
CIC 人循環(huán)免疫復(fù)合物ELISA檢測試劑盒 | 人皰疹病毒7型PCR試劑盒 |
信號su5A(SEMA5A)ELISA試劑盒 | cGMP 人環(huán)磷suan鳥苷ELISA檢測試劑盒 |
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