LeukoLOCK™ 總 RNA 分離系統(tǒng)

LeukoLOCK™ 總 RNA 分離系統(tǒng)是一種創(chuàng)新的全血細胞分餾以及從白細胞群中穩(wěn)定和提取總 RNA 的方法。該試劑盒包含一個 LeukoLOCK™ 分餾 & 穩(wěn)定試劑盒（也可單獨購買；貨號 AM1933）和一個 LeukoLOCK™ 總 RNA 分離試劑盒。

•在幾分鐘內(nèi)從全血中分離白細胞
• 從白細胞中提取總 RNA
• 無需額外的球蛋白還原步驟
• 穩(wěn)定 RNA 以保存表達譜
• 在室溫下保留白細胞數(shù)天

LeukoLOCK™ 系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化以與人血配合使用。血液是細胞信息的存儲庫；然而，使用全血制備的 RNA 中存在球蛋白 mRNA 會干擾下游表達譜分析應(yīng)用。LeukoLOCK™ 系統(tǒng)采用基于過濾柱的白細胞去除技術(shù)，將白細胞從全血和 RNAlater™ 溶液中分離出來，以穩(wěn)定過濾柱上的細胞。通過排除紅細胞，從捕獲的白細胞中純化得到去除固有球蛋白 mRNA 的 RNA，可提高表達譜分析和其他應(yīng)用的樣品實用性（如圖所示）。

白細胞捕獲和穩(wěn)定
將抗凝血的 9–10 mL 樣品通過 LeukoLOCK™ 過濾柱，其可捕獲總白細胞群，同時去除紅細胞（包括網(wǎng)織紅細胞）、血小板和血漿。用磷酸鹽緩沖鹽水沖洗后，用 RNAlater™ 溶液沖洗過濾柱，以穩(wěn)定捕獲的白細胞中的 RNA（參見方案示意圖）。RNA 可立即分離，或穩(wěn)定的細胞可在室溫下放置數(shù)天或在 –20°C 或 –80°C 下放置更長時間（如圖所示）。

RNA 分離
首先在基于–硫氰酸胍的溶液（可釋放 RNA，同時使核酸酶失活）中對捕獲的細胞進行破壞來純化 RNA。收集細胞裂解物并用蛋白酶 K 進行短暫處理。然后通過以下步驟從裂解物中純化 RNA：使用 MagMAX™ 磁珠法技術(shù)進行洗滌，隨后進行 DNase 處理（使用 TURBO DNase™）和最終純化。

表達研究
定量 RT-PCR 和微陣列表達研究均已驗證了純化 RNA 用于可靠轉(zhuǎn)錄組譜分析的適用性（參見圖）。與使用常用的血液 RNA 分離程序處理的 RNA 相比，使用 LeukoLOCK™ 系統(tǒng)分離的 RNA 在擴增后產(chǎn)生更長的中位 aRNA，且存在更高百分比的調(diào)用，無需額外的提取后步驟去除球蛋白 mRNA（參見圖）。由于球蛋白 aRNA 代表全血總 RNA 的 aRNA 峰值的 25–40%，因此，使用去除不需要的球蛋白轉(zhuǎn)錄本的方法時得到可以理解的較低總 RNA 得率。由于競爭的球蛋白轉(zhuǎn)錄本顯著降低，在完成 LeukoLOCK™ 純化后擴增的 RNA 會產(chǎn)生更高的陣列靈敏度。

試劑盒得率
供體之間的回收率有所差異，但通常為 10–20 µg RNA/9–10 mL 全血（如圖所示）。使用 LeukoLOCK™ 系統(tǒng)回收的 RNA 含有低于 1/10 的網(wǎng)織紅細胞來源的 α- 和 β-球蛋白 mRNA（存在于未分餾全血的典型 RNA 樣品中）。