利什曼原蟲(chóng)是一種細(xì)胞內(nèi)寄生的鞭毛蟲(chóng),其生活史分為前鞭毛體和無(wú)鞭毛體兩個(gè)時(shí)期,并需要兩個(gè)宿主才能完成其復(fù)雜的生命周期。前鞭毛體期在無(wú)脊椎動(dòng)物(如白蛉)的消化道內(nèi)寄生,而無(wú)鞭毛體期則在人或脊椎動(dòng)物的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(如巨噬細(xì)胞)內(nèi)寄生。這種寄生蟲(chóng)的多樣性令人驚嘆,寄生人體內(nèi)的利什曼原蟲(chóng)主要有四種:杜氏利什曼原蟲(chóng)、熱帶利什曼原蟲(chóng)、巴西利什曼原蟲(chóng)及墨西哥利什曼原蟲(chóng)。它們通過(guò)白蛉叮咬傳播,悄無(wú)聲息地侵入人體,引發(fā)一系列健康問(wèn)題。
【產(chǎn)品名稱】通用名稱:黑熱病快速檢測(cè)卡
【產(chǎn)品規(guī)格】25T
【預(yù)期用途】
利士曼(黑熱?。z測(cè)試劑盒檢測(cè)卡可用于犬內(nèi)臟利什曼原蟲(chóng)(VL)抗體的定性檢測(cè)。
【檢測(cè)原理】
該檢測(cè)條的硝化纖維膜在檢測(cè)區(qū)包被了重組的VL抗原,在質(zhì)控區(qū)包被了雞抗蛋白A。在實(shí)驗(yàn)中,血清樣本與膠體金結(jié)合物(膠體金標(biāo)記的蛋白A)反應(yīng),而膠體金結(jié)合物預(yù)先包被在檢測(cè)條上?;旌衔镌诿?xì)管作用下沿著硝化纖維膜移動(dòng),然后與重組的VL抗原反應(yīng),并生成一條紅色帶。如果存在該紅色帶表明陽(yáng)性結(jié)果,反之則為陰性結(jié)果。
【試劑盒組成成分】
檢測(cè)條 25份
緩沖液一瓶
【儲(chǔ)存條件】
檢測(cè)條應(yīng)保存在20~30℃(室溫)直至有效期。Chase緩沖液也應(yīng)保存在20~30℃。暴露在超過(guò)30℃溫度下(多5天)會(huì)影響檢測(cè)性能,所以應(yīng)盡量避免。檢測(cè)條不應(yīng)冷凍保存,并且從密封袋中取出后應(yīng)在0.5小時(shí)內(nèi)使用,避免受濕度影響。
【樣本要求】
該實(shí)驗(yàn)中應(yīng)使用犬血清,不能使用全血樣本。不能對(duì)樣本進(jìn)行稀釋,
凝血后盡快離心分離血清,以避免溶血現(xiàn)象的產(chǎn)生。
應(yīng)在采集血清后盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。血清不能長(zhǎng)時(shí)間存放在室溫下。血清于2~8℃可保存3天,更長(zhǎng)時(shí)間則應(yīng)保存在-20℃以下。
實(shí)驗(yàn)前血清平衡至室溫。冷凍的血清必須充分融解。避免反復(fù)凍融。
如果血清需要運(yùn)輸,其包裝應(yīng)該符合聯(lián)邦的傳染源運(yùn)輸法規(guī)。
【檢測(cè)步驟】
實(shí)驗(yàn)前讓血清平衡至室溫
從密封袋或瓶中取出檢測(cè)條
在檢測(cè)條箭頭下方加樣區(qū)加入20ul的血清
在小試管中,或者96孔的組織培養(yǎng)板的微孔中加入2-3滴(150ul)的Chase緩沖液
將檢測(cè)條插入小試管或者微孔中,根據(jù)檢測(cè)條上的箭頭,其末端應(yīng)該朝下
在10分鐘內(nèi)讀取結(jié)果。在讀取結(jié)果前,背景的清晰度是十分重要的。尤其是當(dāng)樣本含低滴度的抗利什曼原蟲(chóng)抗體時(shí),就只有一條很弱的色帶出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)區(qū)(T)。10分鐘后讀取可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果
注意:不要只是加入Chase緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。必須首先加入20ul的血清。
如果在加入捕獲緩沖液后的10-15秒并沒(méi)有觀察到膠體金的移動(dòng),可輕輕壓檢測(cè)條上的樣本加入?yún)^(qū),直到觀察到膠體金的移動(dòng)。
【結(jié)果解釋】
陽(yáng)性結(jié)果
實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性則質(zhì)控帶(C)和實(shí)驗(yàn)帶(T)均出現(xiàn)。一條微弱的色帶也為陽(yáng)性結(jié)果。作為解釋指南,實(shí)驗(yàn)區(qū)的紅色帶的顏色強(qiáng)度與抗利什曼原蟲(chóng)抗體濃度相關(guān)。實(shí)驗(yàn)帶為“弱陽(yáng)性"血清樣本,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能為弱陽(yáng)性但可分辨的紅色帶,(“弱陽(yáng)性"樣本則含有對(duì)重組抗原低親和力或者低滴度抗體)。
編輯搜圖
陰性結(jié)果
實(shí)驗(yàn)為陰性,則只有質(zhì)控帶出現(xiàn)。沒(méi)有出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)帶
無(wú)效結(jié)果
質(zhì)控帶和檢測(cè)帶都沒(méi)有出現(xiàn)結(jié)果,若只有檢測(cè)帶出現(xiàn)紅色線,而質(zhì)控帶沒(méi)有出現(xiàn),則也為無(wú)效結(jié)果
建議使用新的檢測(cè)條和新血清再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
注意:實(shí)驗(yàn)區(qū)的紅色帶的變化是依賴于抗利什曼原蟲(chóng)抗體濃度。然而,該實(shí)驗(yàn)不能檢測(cè)抗體的定量值和增加的百分比。