Panbio登革熱快速檢測試劑（膠體金法）說明書
產(chǎn)品規(guī)格：25T/盒
澳大利亞Panbio公司一直在登革熱（Dengue fever）、羅斯河熱（Ross river fever）的診斷試劑產(chǎn)品方面保持著前沿的市場地位。公司的西尼羅河腦炎（West Nile encephalopalitis）診斷試劑在獲得美國FDA注冊。Panbio登革產(chǎn)品擁有廣闊的產(chǎn)品系列，有著廣泛的應用。
預期作用：
Panbio登革熱快速檢測試劑盒是用來定性檢測人血清、血漿和全血中的登革熱病毒IgM和IgG抗體的方法。這方法能用來鑒別初次和二次感染。它僅能用來檢測具有臨床登革熱癥狀的病人的樣本。結(jié)果是假定陽性的，必須經(jīng)病毒分離、雙份血清分析、免疫組織化學檢測抗原或病毒核酸檢測證實有登革熱病毒感染。
原理：
在處理病人樣本時，登革熱特異性IgM和IgG抗體和包埋在橫過盒膜的兩條線上的抗-人IgM和IgG抗體相結(jié)合。膠態(tài)金復合物包含重組登革熱1~4型抗原被病人的IgM和IgG捕獲而顯現(xiàn)出粉紅色的線。設定一個對照程序來指示方法操作正確。
警示
1.所有的人血產(chǎn)品都應該按可能有傳染性的材料來處理。疾病預防控制中心和國家健康署建議可能傳染的抗原應該在2級生物安全下進行處理。
2.不要用嘴吸取液體，皮膚不要和試劑或病人樣本接觸。
3.嚴格按照操作規(guī)程才能得到最佳的結(jié)果。試劑必須小心地加以保持實驗的準確度和精確度。
4.超出操作規(guī)程時間和溫度范圍做試驗可能會導致無效的結(jié)果。沒有在即定的時間和溫度內(nèi)做試驗必須要重做。
5.試劑盒內(nèi)的成份是經(jīng)一批單位進行質(zhì)量控制的。不同批號的產(chǎn)品不同混合使用。不要與其它制造商的產(chǎn)品混合。
6.小心使用，避免試劑污染。如果確實是有微生物污染或有沉淀，就不要使用。配試劑的儀器、容器或是試劑生物污染都可導致錯誤的實驗結(jié)果。
7.不要加熱失活的樣本。
8.試劑盒貯存在干燥的地方。
9.不要重復使用試劑盒。
10.如果箔袋有破損，試劑盒就不要使用。
11.試驗材料應該按當?shù)氐?、州?或國家法律來處理。
試劑的貯存方法和期限
1.試劑盒貯存在2~30°C，試劑要穩(wěn)定必須保持恒溫，直至失效。有效期參見包裝袋標簽。
2.不要冷凍試劑。
3.在包裝袋上標示的有效期內(nèi)試劑都可使用。
4.試劑超過有效期不能使用。
樣本收集和準備
1. 靜脈血在室溫下（20~25oC）會凝結(jié)成塊，然后根據(jù)全國臨床實驗標準委員會（NCCLS）（收集診斷靜脈血的認可標準程序，H3-A4, 1998）進行離心。
血清應盡快分離并冷藏（2~8oC）或是冷凍（-20oC），如果在兩天內(nèi)不試驗的話，應冷凍在更低的溫度下。黃疸血清、有溶血的、脂血的或是有細菌生長的血清都不推薦使用
2. 不推薦使用自我解凍的致冷機來貯存樣本，因為它能引起樣本經(jīng)過凍融周期和降低抗體水平，因此產(chǎn)生假結(jié)果。
3.指端血采集后要馬上測試。NCCLS建議含有EDTA或肝素作為抗凝劑的全血可以不經(jīng)離心就立即使用，或者也可以在2~8 oC放上72小時（血樣處理加工的認可標準程序，H18-A2, 1999）
4.發(fā)熱開始后樣本的采集時間決定了試驗的準確度。在發(fā)熱開始后的6~14天采得的樣本能得到最佳的結(jié)果。
試劑盒組成
每個試劑盒包括下面的東西，數(shù)量足夠能完成包裝袋標簽上標明的測試份數(shù)。
•25小包。每包里面有一個試劑盒和一個10µL的MicroSafe®移液管。
•1份使用說明書。
•1管3ml的緩沖液（含有0.1% Proclin）
必要的但不提供的材料
•計時器
一般程序
MicroSafe®移液管的操作方法
MicroSafe®移液管能用來吸全血、血漿或血清。
在吸液時請嚴格遵照下面的使用說明（圖1）：
1.水平地拿著移液管。
2.吸液時，移液管的尖duan和測試樣本接觸（見下圖1）。
3.輕輕地擠泡排出樣本。
測試程序：
注意：在開始實驗前確保所有的試劑平衡至室溫（20-25°C）。
要用時，才從袋內(nèi)拿出試劑盒和MicroSafe®移液管。
. 用微量移液器或是提供的MicroSafe®移液管在圓孔內(nèi)加入10µL的全血、血清或血漿。
. 讓樣品wanquan吸收融入圓孔里的樣品墊內(nèi)。
. 在方孔上方1cm處垂直地拿著緩沖瓶。
. 在試劑盒底部的方孔內(nèi)加入2滴緩沖液。
加緩沖液的剛剛15分鐘后讀結(jié)果。
. 在測試區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)粉紅色線的痕跡就表明陽性結(jié)果。
. 超過15分鐘后讀取的結(jié)果將認為是無效的，必須要重做。
錯誤的使用用法
1.加液時，瓶子不能水平。
2.加液時，瓶子不能接觸到樣品孔
質(zhì)量控制：
1.如果沒有出現(xiàn)對照線，則測試無效得重做。如果測試無效，則病人結(jié)果不能報告。
2.全血樣品可能會在視窗內(nèi)出現(xiàn)紅色的背景值。如果它沒有遮蓋住測試線則結(jié)果有效。
3. 質(zhì)量控制需要必須遵照當?shù)氐?、州?或國家法律或委任書和你們實驗室標準質(zhì)量程序。建議用戶參照NCLSI C24-A和42 CFR 493.1202(c)中的合適的質(zhì)量控制實踐指導
結(jié)果解釋：
登革熱初次感染表現(xiàn)為發(fā)熱后3~5天能檢測到IgM抗體。二次感染表現(xiàn)為感染發(fā)作后的1~2天特異性IgG水平升高，還經(jīng)常伴有IgM水平的升高。應該結(jié)合IgM和IgG測試線來解釋結(jié)果。單獨的線分析可能不夠準確。
C：對照線 M：IgM測試線 G：IgG測試線
初次感染
在IgM和對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶
測試說明IgM抗體陽性，且表明有初次登革熱感染。
二次感染
在IgM、IgG和對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶
測試說明IgM和IgG抗體陽性，且表明二次登革熱感染。
二次感染
在IgG和對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶
測試說明IgG抗體陽性，且表明二次登革熱感染。
陰性
僅僅在對照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色條帶
沒有檢測到IgM和IgG抗體。結(jié)果不能排除登革熱感染。如果懷疑有登革熱感染，則在3~4天后重新測試。
無效
在對照區(qū)域沒有出現(xiàn)粉紅色條帶
測試無效得重做。
測試的局限性：
1.一個單獨測試樣本的分析不能作為診斷的weiyi標準。
2.在早期感染和一些二次感染中， IgM抗體的可檢測水平可能很低。一些病人在感染后的頭7~10天可能不會產(chǎn)生可檢測到水平的抗體。只要癥狀還存在，我們就建議在第一份樣本后的3~4天對病人重新進行測試。
3. 和黃病毒屬出現(xiàn)血清學交叉反應是常見的事（即在登革熱1，2，3，4型和圣路易腦炎、西尼羅河、日本腦炎、黃熱病病毒等之間）。
4.最終的診斷應建立在結(jié)合測試結(jié)果和其它臨床和實驗室發(fā)現(xiàn)的基礎之上。
5. 不能用來做一般人群的篩查。陽性預值依賴于現(xiàn)存在病毒的可能性。只能對有臨床癥狀的病人進行測試，或者有可疑暴露時。
6.抗體的繼續(xù)存在或不存在不能用來決定治療的成功與否。
7.從免疫抑制病人得來的結(jié)果解釋要慎重。
8.最佳的測試結(jié)果來自發(fā)熱后的6~14天采集的樣本。
性能鑒定數(shù)據(jù)
靈敏性和特異性
為了評估Panbio Dengue Duo Cassette的靈敏性和特異性，我們用血清、血漿和全血在內(nèi)部和馬來群島和斯里蘭卡獨立的試驗地點進行了試驗。
血清
回顧性地選擇的樣本來自于馬來群島一個試驗點的臨床懷疑有登革熱感染的病人在住院后采集的冷凍的血清。一組血清包括30對初次登革熱感染病人的血清、30對二次感染病人的血清和80份經(jīng)實驗室測試是登革熱感染陰性病人的血清，對這些進行了評估。登革熱診斷是建立在內(nèi)部IgM ELISA法和血凝抑制（HAI）測試的基礎之上的，HAI是用滴度≥1:2560來定義二次感染的。結(jié)果概括見表1。
血漿
Panbio公司用208份血漿樣本對Panbio登革熱 Duo小盒的性能進行了臨床研究。經(jīng)Panbio登革熱 Duo IgM 和 IgG 捕獲ELISA法認定，這208份樣本包括93份血清陰性、32份初次感染和83份二次感染樣本。結(jié)果概括見表2。
全血
斯里蘭卡的一個研究所測試了331份全血和血清樣本，這些樣本來自于那些因符合登革熱感染體征和癥狀而送到醫(yī)院的病人。這組包括74份血清陰性、77份初次感染和180份二次感染樣本。用試劑盒內(nèi)提供的MicroSafe移液管采集手指血，用Panbio 登革熱Duo小盒來測試。在靜脈采集得到血清，再用Panbio登革熱Duo IgM 捕獲 和 IgG 捕獲 ELISA (E-DEN01D)來確定。測試結(jié)果與登革熱的血清狀況進行比較以測定那方法用來測定全血樣本時的靈敏性，特異性和一致性。結(jié)果概括見表3。
.95% CI*
相對血清靈敏性 = 104/108 96.3% 90.8 - 99.0%
相對血清特異性 = 76/80 95.0% 87.7 - 98.6%
相對血清一致性 = 162/188 86.2% 81.2 - 91.1%
*CI = 可信區(qū)間
95% CI*
相對血清靈敏性= 110/115 95.7% 92.9 - 98.4%
相對血清特異性= 77/93 82.8% 77.7 - 87.9%
相對血清一致性= 178/208 85.6% 80.8 - 90.4%
*CI =可信區(qū)間
95% CI*
相對血清靈敏性= 231/257 89.9% 86.2 - 93.6%
相對血清特異性= 66/74 89.2% 82.1 - 96.3%
相對血清一致性= 274/331 82.8% 78.7 - 86.8%
*CI =可信區(qū)間
交叉反應
通過測試一組208份來自其它確診病人（非登革熱）的血清來測定Panbio登革熱Duo小盒的診斷特異性。還測試了一組來自沒有證據(jù)表明感染的受試者的血清。結(jié)果概括參見表4。
表4 Panbio登革熱Duo小盒交叉反應性研究
重現(xiàn)性
為了測定Panbio登革熱Duo小盒的重現(xiàn)性，我們用3個批號的試劑盒在不同的3天對9份血清進行測試。那9份血清代表了登革熱初次感染、二次感染和沒有感染，然后將那測試結(jié)果和參照結(jié)果進行了比較。在15分鐘時讀取組內(nèi)和組間測試結(jié)果，并概括見表5。
初次感染是建立在IgM陽性和IgG陰性讀數(shù)基礎之上的。二次感染是建立在IgG陽性和IgM陽性或陰性讀數(shù)基礎之上的。所有的對照線都是陽性的。
說明：健侖生物為澳大利亞Panbio公司系列產(chǎn)品中國地區(qū)總代理。此本中文版說明書是由廣州健侖生物科技有限公司研究人員翻譯，過程中如有錯漏之處，請以廠家英文版說明書為準。謝謝！
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