細胞簡介
人臍帶間充質(zhì)干細胞江苑生物(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細胞,廣泛應用于組織工程,細胞治療和基因治療。江苑生物人臍帶間質(zhì)干細胞取自健康足月分娩孕婦的臍帶,擁有強大的自我更新能力并具有多向分化潛能。
間充質(zhì)干細胞是干細胞的一種,因能分化為間質(zhì)組織而得名,具有亞分化潛能,在特定的體內(nèi)外環(huán)境下,能夠誘導分化成為多種組織細胞,例如神經(jīng)、心臟、肝臟、骨、軟骨、肌腱、脂肪、上皮等細胞。間充質(zhì)干細胞廣泛分布于胎兒和成體的骨髓、骨膜、松骨質(zhì)、脂肪、滑膜、骨骼肌、胎肝、乳牙、臍帶、臍帶血中,其中臍帶來源的間充質(zhì)干細胞質(zhì)量高、純凈、數(shù)量多。
間充質(zhì)干細胞除了具有強大的增殖能力和多向分化潛能,還具有免疫調(diào)節(jié)功能,通過細胞間的相互作用及產(chǎn)生細胞因子抑制T細胞的增殖及其免疫反應,從而重塑免疫環(huán)境。同時,間充質(zhì)干細胞具有來源方便,易于分離、培養(yǎng)、擴增和純化,多次傳代擴增后仍具有干細胞特性,不存在免疫排斥的特性。正是由于間充質(zhì)干細胞所具備的優(yōu)點,使其在治療多種疾病中具有廣闊的臨床應用前景。
方法簡介
江苑生物實驗室分離的人臍帶間充質(zhì)干細胞采用組織貼塊法制備而來,細胞總量約為1×106 cells /T25瓶。
質(zhì)量檢測
江苑生物實驗室分離的人臍帶間充質(zhì)干細胞經(jīng)測試,具有的增殖和分化潛能,可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。流式檢測結(jié)果顯示,HLA-DR、CD34、CD45陰性(<5%);CD90、CD105、CD73陽性(>90%)。且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、內(nèi)毒素、細菌、酵母和真菌等。
運輸和保存
1.1 mL凍存管包裝干冰運輸,收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.T25瓶培養(yǎng)的細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
培養(yǎng)瓶細胞接收后的處理
1.收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中靜置3-4 h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2.請在顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后依據(jù)。
3.細胞收貨脫落:若細胞在快遞運輸途中因振動脫落,先將培養(yǎng)瓶放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中靜置3-4 h,讓少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。若仍有脫落聚集的細胞,則 (1) 收集所有細胞懸液,1000 rpm離心5 min,保留沉淀;(2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中,重懸沉淀,置于37℃消化2 min左右;(3) 向離心管內(nèi)加入5 mL*培養(yǎng)基終止消化;(4) 1000 rpm,離心5 min,丟棄上清,用5 mL*培養(yǎng)基(補加1-5% FBS,促進貼壁)重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi);(5) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的*培養(yǎng)基。
4.收貨細胞的培養(yǎng)和傳代:在顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),若細胞生長密度在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基,加入新配制的*培養(yǎng)基,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達80%-90%以上,可以對細胞進行傳代處理。
5.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng))不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用合適的新鮮培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。
凍存細胞接收后的處理
收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇。
細胞復蘇:將含有1 mL細胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍,回溫后噴以75 %酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。將凍存管中細胞加入到含4-6 mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min,棄去上清液,*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
培養(yǎng)信息
培養(yǎng)基:10% FBS、DMEM/F12、1% Penicillin-Streptomycin
換液頻率:每2-3天換液一次。
組織來源:人臍帶
生長特性:貼壁生長
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)更佳
消化液:0.25%胰蛋白酶,37℃消化2 min左右;1:3-5傳代
培養(yǎng)條件:氣相:空氣 95%,CO2 5%;溫度:37℃
人臍帶間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)周期有限,建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗
注意事項
1.本細胞僅用于科學研究,不得用于臨床治療。
2.請注意無菌操作,避免污染。
人臍帶間充質(zhì)干細胞江苑生物