膠原蛋白及多肽生產(chǎn)線

膠原蛋白及多肽生產(chǎn)線產(chǎn)品簡介

由于膠原是細胞外間質(zhì)成分，在體內(nèi)以不溶性大分子結(jié)構(gòu)存在，并與蛋白多糖、糖蛋白等結(jié)合在一起，因此膠原的制備包括材料的選擇、預(yù)處理、酸堿酶鹽水法提取、不同類型膠原的分離和純化。

預(yù)處理

除膠原蛋白外，動物骨中還含有油脂、多種礦物質(zhì)和其他雜質(zhì)，因此在被用于提取膠原蛋白之前必須進行預(yù)處理。先剔除動物骨上殘留的肉質(zhì)和肌腱等雜物，粉碎后用 正丁醇或正己烷萃取出骨油。zui后除去骨中無機物以提高膠原蛋白的得率。除去骨中的礦物質(zhì)可用稀酸或EDTA溶液。有人用原料用5倍質(zhì)量的 1.0moL/LHCL脫鈣處理2d，用正乙烷脫脂后再用胃蛋白酶酶解，在加酶量150U/g，pH值1.7，37℃條件下處理120min，然后在固液 比1∶6的情況下抽提5h，在此條件下，提取率可達18%；還有人用EDTA溶液（pH7.4）浸泡骨料5d，可有效脫去骨料中的羥基磷灰石。

水法

熱水提取法是將原料經(jīng)過除雜蛋白等前處理之后，在一定條件下直接用熱水浸提已經(jīng)變性了的膠原蛋白或水提取膠原蛋白膠原蛋白水解物，使用的溫度有100℃沸水浴、60-70℃、40-45℃。

酸法

酸法提取是利用一定濃度的酸溶液在一定的條件下提取膠原蛋白，主要采用低離子濃度酸性條件破壞分子酸提取膠原蛋白間 鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解，采用酸法提取的膠原蛋白通常成為酸溶性膠原蛋白。酸溶解法可將沒有交聯(lián)的膠原分子溶解出來，也可溶解含有醛胺類交聯(lián) 鍵的膠原纖維，然后釋放到溶劑中。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用低溫酸法提取的膠原zui大程度的保持了其三螺旋結(jié)構(gòu)，適用于科研生物材料及原 料的制備。通常的做法是將適當濃度的酸液按一定料液比加入到經(jīng)過預(yù)處理的骨粉中，于0～25℃攪拌提取一定時間。在采用酸法進行膠原蛋白的提取時，注意提 取溫度不宜過高，以免膠原蛋白的生物活性發(fā)生破壞。取樣經(jīng)前處理后，勻漿在低溫下用酸浸提，離心即可得酸溶性膠原蛋白（acid-soluble collagen，ASC）。

膠原蛋白及多肽生產(chǎn)線膠原蛋白的提取一般有三種方法：一是高壓輔助的物理方法；二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學方法，根據(jù)溶劑 的不同，可分為熱水浸提法、酸法、堿法、鹽法；三是用酶的生物化學法。一般來說，高壓輔助和熱水抽提針對明膠的提取，而低溫抽提和酶法針對膠原的提取，但 其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境，把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來。在實際提取過程中，不同提取方法之間往往相互結(jié)合，可以得到較好的提取效果。采用超高壓處理系統(tǒng)對原料給予高壓處理一段時間，使其組織結(jié)構(gòu)和膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生松弛、變性，便于分離提取。

產(chǎn)品說明

作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸、磷酸、甲酸、乙酸、蘋果酸、檸檬酸等，但大多數(shù)研究集中于乙酸抽提，像Maria Sadowska等用0.5mol/L檸檬酸在室溫下提取骨膠原蛋白，其提取率略低于乙酸提取。檸檬酸因不產(chǎn)生顏色和異味得以廣泛使用于食品工業(yè)的膠原蛋 白的提取。

酸法處理時，反應(yīng)強烈，水解*，多生成氨基酸混合物，而且使用酸提取時，根據(jù)酸濃度、水解溫度、水解時間等條件的 不同，可以得到分子量不均的膠原水解物。但是在即使中等濃度酸*水解過程中色氨酸也會全部被破壞，絲氨酸和酪氨酸也會部分被破壞，且設(shè)備腐蝕嚴重。因 此，酸法溶出生物科研膠原要準確控制酸度、溫度、時間等影響因素。由于各種不足，酸法很少單獨使用，一般和酶法配合。比如以豬皮為原料，在檸檬酸 (pH8.6)和胃蛋白酶協(xié)同下提取膠原蛋白。在處理后的豬皮中加0.05moL/L含有胃蛋白酶的檸檬酸溶液（pH2.5-3）處理一段時間，然后再用 NaCL鹽析，zui后提取率為12.35%，提取物保持了完整三股螺旋結(jié)構(gòu)的I型膠原蛋白。還有人以雛雞胸軟骨為原材料，在0.5moL/L醋酸條件下經(jīng)胃 蛋白酶多次消化，在4℃，20000r條件下離心20min，zui后應(yīng)用DEAE-Sephadex A-50進行離子交換層析，之后透析，再用NaCL鹽析，zui后得到純化的膠原蛋白Ⅱ型。