黃曲霉毒素B1快速檢測試劑盒_進口試劑盒貨號RNM 98001 黃曲霉毒素M1檢測試劑盒 Aflatoxin M1 ELISA Test Kit 96T 美國REAGEN黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫反應測試盒是用于檢測谷類，飼料，肌肉，牛奶，花生和阿月渾子（開心果）中黃曲霉毒素B1的殘留。齊一生物銷售：；
REAGEN™黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫反應試劑盒RNM98007
1．概述
REAGEN™黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫反應測試盒是用于檢測谷類，飼料，肌肉，牛奶，花生和阿月渾子（開心果）中黃曲霉毒素B1的殘留。該試劑盒特點包括：
- 高回收率（80-105%），快速（10-40分鐘）。
- 高靈敏度（0.05ng/g或ppb）
- 高重現(xiàn)性。
- 快速的ELISA檢測方法（在不考慮樣品數(shù)量下只需不到2小時）。
黃曲霉毒素B1快速檢測試劑盒_進口試劑盒2．試劑盒原理
REAGEN™黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫反應測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應原理，抗原已經(jīng)包被于微孔板上。分析時，樣品同一抗加入孔中，如果樣品中含有毒素，會競爭抗體，因而抑制板上包被的毒素與抗體結合。HRP標記的二抗，與結合在板上一抗相結合后，加入TMB底物，底物的顏色顯色強度與樣品中毒素的含量成反比。
3.試劑盒組成
內(nèi)容物 | 規(guī)格 | 保存 |
黃曲霉B1包被板(Aflatoxin B1Coated Plate) | 96孔板（12×8 孔） | 2-8℃ |
黃曲霉毒素B1標準品(Standards)： 0ng/ml陰性質控(Negative control) 0.05ng/ml 0.1ng/ml 0.2 ng/ml 0.4ng/ml 0.8 ng/ml 回收用100ng/ml(Spiking,可選) |
1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL | 2-8℃ |
黃曲霉毒素B1一抗(Aflatoxin B1 Antibody #1) | 15mL | 2-8℃ |
HRP-酶標二抗(HRP-Conjugated Antibody #2) | 18mL | 2-8℃ |
20×濃縮洗液(Wash Solution) | 30mL | |
終止液(Stop Buffer) | 20mL | |
TMB底物(Tmb Substrate) | 10mL |
本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果一個月內(nèi)不使用試劑盒，黃霉
素毒素B1標準品，一抗和1×HRP-二抗應置于-20℃或者冷凍保藏。
4.檢測限
檢測物質 | 檢測下限（ng/g） |
干肉/魚，谷類，飼料，種子 | 1.0 |
肌肉/肝臟/腎臟 | 0.5 |
牛奶 | 0.5 |
花生醬 | 0.5 |
蔬菜/豆類/花生/橄欖油 | 2.5 |
5.交叉反應
藥物 | 交叉反應率（%） |
黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1) | 100 |
黃曲霉毒素B2(Aflatoxin B2) | 49 |
黃曲霉毒素M1(Aflatoxin M1) | 45 |
黃曲霉毒素M2(Aflatoxin M2) | 24 |
黃曲霉毒素G1(Aflatoxin G1) | 37 |
黃曲霉毒素G2(Aflatoxin G2) | 8 |
6．其他需要而本試劑盒未提的設備或材料
- 酶標儀(450nm)
- 恒溫培養(yǎng)箱
- 勻質器
- 漩渦振蕩器
- 微量加樣器(10、20、100和1000mL各一支)
- 多道槍：50-300mL
- 甲醇
7.注意事項
實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得實驗效果。
- 標準品中含有黃曲霉毒素B1，請小心使用。
- 不要使用過期的試劑盒。
- 不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。確保二抗及二抗稀釋液正確配制。
- 盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。
- 水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。
- 加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。
- 孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的*性，先添加標準品后添加樣品。
- 從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。
- 將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。
8．樣品的準備
樣品保存在2-4℃不超過1-2天，如果需要保存較長的時間，應該放置-20℃。樣品使用前應恢復到室溫。
1） 干肉/魚，谷類，飼料，種子
- 研磨并混勻適量的樣品；
- 稱取5g磨碎的樣品，放入適當?shù)娜萜髦校?/span>
- 加入25mL70%甲醇，用手或者振蕩器劇烈振蕩20分鐘；
- 室溫（22.5±2.5）°C下4000 rpm離心10分鐘；
- 取1mL上清液，加入1mL蒸餾水或者去離子水稀釋；
- 取50μL作檢測。
稀釋倍數(shù)：10
備注：如果需要，樣品所取的量可以增加，同時甲醇/水的用量也必須作相應的改變。例如取10g樣品，應該加入50mL70%甲醇。如果樣品中黃曲霉毒素含量很高，那么樣品必須經(jīng)過稀釋，請用35%甲醇進行稀釋。
2）肌肉/肝臟/腎臟
- 研磨并混勻適量的樣品；
- 稱取5g磨碎的樣品，放入適當?shù)娜萜髦校?/span>
- 加入25mL70%甲醇，用手或者振蕩器劇烈振蕩20分鐘；
- 室溫（22.5±2.5）°C下4000 rpm離心10分鐘；
- 取1mL上清液，加入1mL蒸餾水或者去離子水稀釋；
- 取50μL作檢測。
稀釋倍數(shù)：10
備注：如果需要，樣品所取的量可以增加，同時甲醇/水的用量也必須作相應的改變。例如取10g樣品，應該加入50mL70%甲醇。如果樣品中黃曲霉毒素含量很高，那么樣品必須經(jīng)過稀釋，請用35%甲醇進行稀釋。
3）花生醬
（1） 研磨并混勻適量的樣品
（2） 稱取2g勻質的樣品，放入適當?shù)娜萜髦?/span>
（3） 加入4mL35%甲醇，用手或者振蕩器劇烈振蕩20分鐘
（4） 室溫（22.5±2.5）°C下4000 rpm離心10分鐘
（5） 取50μL作檢測
稀釋倍數(shù)：3
4）牛奶
（1）.脫脂牛奶：用35%甲醇按1：9的比例稀釋牛奶樣品（20ul牛奶+180ul35%甲醇），取50ul稀釋樣品以待檢測
（2）.含脂牛奶：取適量樣品，室溫（22.5±2.5）°C4000g離心5min，棄去上層脂肪層，用35%甲醇按1：9的比例稀釋牛奶樣品（20ul牛奶+180ul35%甲醇），取50ul稀釋樣品以待檢測
稀釋倍數(shù)：10
5）蔬菜/豆類/花生/橄欖油
（1） 稱取0.5g樣品，加入2.5ml35%的甲醇。
（2） 渦流10分鐘或高速渦流3分鐘,靜置2分鐘
（3） 去掉上層脂肪液，取50μL下清液作檢測
稀釋倍數(shù)：5
9．酶聯(lián)免疫反應測試步驟
試劑準備
注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。
1x洗液的制備
1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合
檢測
以下為計算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。
試劑 | 每個反應需要的體積 | 24次反應的體積 |
一抗 | 100 mL | 2.4mL |
二抗工作液 | 150 mL | 3.6mL |
工作洗液 | 2 mL | 48 mL |
終止液 | 100 mL | 2.4 mL |
底物 | 100 mL | 2.4 mL |
- 加入50mL的標準液于所設定的孔中；
- 加入50mL的樣品于所設定的孔中
- 在每孔中加入100mL一抗， 輕敲微孔板邊緣混勻60秒；
- 室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘
洗板3次，每次加入250mL 1×洗液，zui后一次盡量甩干并在吸水紙上吸干；
- 每孔加入150mL 1×二抗工作液，室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘
洗板3次，每次加入250mL 1×洗液，zui后一次盡量甩干并在吸水紙上吸干；
- 每孔加入100mL的TMB底物，用手敲板邊緣1分鐘混合均勻；
- 室溫（22.5±2.5）°C避光孵育15分鐘， 加入100mL的終止液終止反應。
- 在450nm下讀OD值(讀數(shù)前，用無絨布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。
10．結果計算
- 分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。
- 相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100
- 以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。
- 從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。
- 樣品檢測下限和定量下限計算方法如下：
樣品檢測下限 = (0.05ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))
樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))
備注：如結果呈陽性反應，應該用其他檢驗方法（如色譜/質譜方法等）進行確證。標準曲線見說明書齊一生物科技歡迎您訂購咨詢.手機.在線咨詢:1091367877
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