實(shí)驗(yàn)十七 細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌的菌落觀察和細(xì)菌菌落制片

一、墓本原理
　　菌落形態(tài)是指某種微生物在一定的培養(yǎng)基上由單個(gè)菌體形成的群體形態(tài)。細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌，每一類微生物在一定培養(yǎng)條件下形成的菌落各具有某些相對(duì)的特征，利用觀察這些特征，來區(qū)分各大類微生物及初步識(shí)別、鑒定微生物，方法簡(jiǎn)便快速，在科研和生產(chǎn)實(shí)踐中常被采用。
　　利用血液培養(yǎng)基富有營(yíng)養(yǎng)及粘性等特性來培養(yǎng)細(xì)菌，在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落在固定時(shí)粘性很大，能夠牢固地附著在載玻片或蓋玻片上，便于制片和觀察。另外，血液培養(yǎng)基又是較好的保存菌種用培養(yǎng)基，故由此培養(yǎng)基所制的菌落制片能保存較長(zhǎng)時(shí)間。
二、器材
　　圓褐固氮菌，枯草芽孢桿菌，灰色鏈霉菌，釀酒酵母，青霉的單個(gè)菌落平板，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；
　　Bouin氏固定液，0．01％結(jié)晶紫溶液，羊血或兔血，肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，酒精等。
三、操作步驟
　　1．觀察圓褐固氮菌、枯草芽孢桿菌、灰色鏈霉菌、釀酒酵母、青霉的單個(gè)菌落特征，并按實(shí)驗(yàn)一菌落特征描述的方法記錄結(jié)果。
　　2．血液瓊脂培養(yǎng)基的制備：
　?。?）成分pH7．6肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基10ml，無菌脫纖維羊血（或兔血）1ml。
　?。?）將肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化。
　?。?）待冷至45℃時(shí)，以無菌操作加1ml無菌脫纖維羊血于培養(yǎng)基內(nèi)，立即搖蕩使血液和瓊脂培養(yǎng)基充分混勻。
　　（4）迅速以無菌操作倒入平板，使成血液瓊脂平板，注意不要產(chǎn)生氣泡。
　?。?）置37℃過夜，如無菌生長(zhǎng)即可使用。
　?。?）將無菌的平板取出進(jìn)行劃線接種分離單個(gè)菌落，因要保持瓊脂表面完整，接種改用圓頭光滑玻棒，注意不要把瓊脂劃破。接種后，倒置于37℃溫室中培養(yǎng)，次日觀察結(jié)果。如有單獨(dú)菌落出現(xiàn)，即可進(jìn)行下項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。
　　3．細(xì)菌菌落制片
　?。?）細(xì)菌菌落印取選擇一個(gè)較小的單獨(dú)菌落，用小刀將菌落周圍約10—15mm的正方瓊脂切下，將此瓊脂塊上長(zhǎng)有菌落的一面朝下，輕放在蓋玻片上，然后連同瓊脂塊將蓋玻片小心放于Bouin氏固定液中約1小時(shí)，直至瓊脂*變?yōu)榘咨笕〕?，將瓊脂小心剝?nèi)ィ瑒儠r(shí)注意勿損傷菌落，僅使菌落留下，附著在蓋玻片上。
　　（2）用細(xì)水流輕輕沖洗附有菌落的蓋玻片。
　　（3）用0．01％結(jié)晶紫染液染色3分鐘后水洗，吸干。
　?。?）脫水將蓋玻片置于由低濃度到高濃度的酒精中（35％、50％、60％、70％、80％、95％、100％）各5分鐘，但在100％酒精中浸15分鐘。
　　（5）透明取出經(jīng)過脫水的蓋玻片，再放入二甲苯中2分鐘。
　?。?）封固從二甲苯中取出蓋玻片，用軟紙拭去菌落周圍的二甲苯。隨即加一小滴加拿大乳膠于一潔凈載玻片的*，迅速反轉(zhuǎn)蓋玻片，輕輕地放在載玻片上，使加拿大乳膠鋪滿蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡，如果有氣泡即輕輕壓出。用低倍顯微鏡觀察其菌落特征。待乳膠*干燥，一二天后裝木匣內(nèi)保存。
四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告