放線菌及霉菌形態(tài)觀察

一、實(shí)驗(yàn)原理 　　

放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。常見(jiàn)放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲（簡(jiǎn)稱(chēng)“基絲”），基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲（簡(jiǎn)稱(chēng)“氣絲”），并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無(wú)氣絲。在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類(lèi)的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。 　　

霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體（尤其是繁殖菌絲）及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類(lèi)霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實(shí)驗(yàn)采用插片法。 　　

插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長(zhǎng)期的形態(tài)。

二、試劑與器材 　　

1、材料 黑曲霉、青霉和根霉，細(xì)黃鏈霉菌或青色鏈霉菌，滅菌的高氏I號(hào)瓊脂和滅菌的查氏培養(yǎng)基。 　　

2、實(shí)驗(yàn)器材 經(jīng)滅菌的：平皿、玻璃紙、無(wú)菌吸管、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 　　

倒平板→接種→插片→培養(yǎng)→鏡檢

四、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng) 　　

1、倒平板要厚一些，接種時(shí)劃線要密。 　　

2、插片時(shí)要有一定角度并與劃線垂直。 　　

3、觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，更換高倍鏡觀察。 　　

4、如果用0、1%美藍(lán)對(duì)培養(yǎng)后的蓋玻片進(jìn)行染色后觀察，效果會(huì)更好。