coli TG1單菌落,接種于5ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃下振蕩培養(yǎng)12小時左右,取50ul培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入5ml LB中,37℃振蕩培養(yǎng)1~1.5小時至對數(shù)生長期OD600=0.5左右.2、感受態(tài)細(xì)胞的制備⑴、將培養(yǎng)液1．5ml轉(zhuǎn)入離心管中,冰上放置20分鐘.⑵、置于4℃,5000rpm離心5分鐘,倒盡上清.

摘要: coli TG1單菌落,接種于5ml LB液體 培養(yǎng)基 中,37℃下振蕩培養(yǎng)12小時左右,取50ul培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入5ml LB中,37℃振蕩培養(yǎng)1~1．5小時至對數(shù)生長期OD600=0．5左右.2、 感受態(tài)細(xì)胞 的制備⑴、將培養(yǎng)液1．5ml轉(zhuǎn)入離心管中,冰上放置20分鐘.⑵、置于4℃,5000rpm離心5分鐘,倒盡上清.⑶、添加一半菌液體積（750ul）預(yù)冷的50mM的CaC......
1、 受體菌的培養(yǎng)
    從平板上挑取新的活化后的E.coli TG1單菌落,接種于5ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃下振蕩培養(yǎng)12小時左右,取50ul培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入5ml LB中,37℃振蕩培養(yǎng)1~1．5小時至對數(shù)生長期OD600=0．5左右.
2、 感受態(tài)細(xì)胞的制備
⑴、將培養(yǎng)液1．5ml轉(zhuǎn)入離心管中,冰上放置20分鐘.
⑵、置于4℃,5000rpm離心5分鐘,倒盡上清.
⑶、添加一半菌液體積（750ul）預(yù)冷的50mM的CaCl2,用槍輕輕吹打,使細(xì)胞懸浮,
冰上放置30分鐘.
⑷、4℃,5000rpm離心5分鐘,棄上清.
⑸、再加入200ul預(yù)冷的50mM的CaCl2溶液,輕輕懸浮細(xì)胞,冰上放置備用.
    新鮮的感受態(tài)細(xì)胞在4~24小時之內(nèi)可直接用于轉(zhuǎn)化,也可加入總體積15%的無菌甘油,
    混勻后置于-70℃可保存6個月,轉(zhuǎn)化效率基本不變.
3、 轉(zhuǎn)化
⑴、取200ul搖勻后的感受態(tài)細(xì)胞懸液,加入質(zhì)粒4ul,用槍輕輕吹打均勻,冰浴30分鐘.
⑵、42℃,保溫90秒鐘后,迅速放入冰中,冰浴5min.
⑶、加入37℃預(yù)熱的1ml的LB液體培養(yǎng)基,混勻.37℃培養(yǎng)1小時,使細(xì)胞恢復(fù)正常生長狀態(tài).
⑷、3000rpm離心10分鐘.
⑸、棄去1ml上清,余下的200ul用槍輕輕吹打均勻,使 細(xì)菌 充分懸浮后均勻涂布于含Amp的篩選平板上.
⑹、37℃正面向上放置半小時后,倒置培養(yǎng)8~12小時.
    對照1、以同體積的無菌雙蒸水代替 DNA 溶液,其它操作與轉(zhuǎn)化組相同.
    對照2、以同體積的50mM的CaCl2溶液代替感受態(tài)細(xì)胞懸液,其它操作與轉(zhuǎn)化組相同.