從大量的植物或動(dòng)物組織中分離出特異性的細(xì)胞類型是費(fèi)力和棘手的.為了研究表觀遺傳學(xué)上的改變和在不同細(xì)胞系中不同表達(dá)的基因,如癌細(xì)胞與正常細(xì)胞,或者擬南芥中兩種類型的表皮細(xì)胞（epidermal cell）,人們通常必須采用激光捕獲顯微切割（laser capture microdissection, LCM）或者熒光激活細(xì)胞分類（fluorescence-activated cell sorting, FACS）方法.LCM使用激光和顯微鏡來(lái)直接從組織中輕快地挑出單個(gè)細(xì)胞到容器里.這就像是在玩挑圓片游戲一樣,但是每次實(shí)驗(yàn)需要挑出上千個(gè)單獨(dú)細(xì)胞,因而這是件非常煩惱的事.與FCAS一樣,LCM也需要昂貴的設(shè)備.
來(lái)自Fred Hutchinson癌癥研究中心的Roger Deal和Steven Henikoff已經(jīng)開發(fā)了一種便宜且又簡(jiǎn)單的方法,即特定細(xì)胞類型標(biāo)記的細(xì)胞核分離（isolation of nuclei tagged in specific cell types, INTACT）.該方法基于標(biāo)準(zhǔn)的基因技術(shù),并采用已知的生物學(xué)中zui強(qiáng)的非共價(jià)結(jié)合反應(yīng)---一種復(fù)合維生素B,生物素（biotin）,結(jié)合到細(xì)菌蛋白鏈霉親和素（streptavidin）.這種分離方法不需要特殊的培訓(xùn),僅使用常用的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備---數(shù)個(gè)移液管、一個(gè)磁體以及鏈霉親和素包被的磁珠.Deal現(xiàn)在正計(jì)劃使用這種技術(shù)研究多種植物組織中的細(xì)胞分化.
INTACT該方法具體流程如下（見(jiàn)下圖）：
①研究人員插入表達(dá)一種融合蛋白NTF的基因,該融合蛋白包括一種結(jié)合到細(xì)胞核被膜上的蛋白,用于可視性觀察的綠色熒光蛋白GFP,和一種結(jié)合到生物素上的蛋白BLRP.他們還加入一種表達(dá)連接酶BirA的基因,該連接酶催化生物素結(jié)合到BLRP上.
②NTF還要附加在細(xì)胞類型特異性的啟動(dòng)子后面,這樣當(dāng)植物幼苗（seedling）生長(zhǎng)時(shí),插入的基因只在期望的細(xì)胞類型中表達(dá)---這里為根毛細(xì)胞.BirA在所有細(xì)胞中表達(dá),但只催化生物素結(jié)合到帶有NTF標(biāo)記的細(xì)胞核表面上的BLRP.
③將植物組織全部搗碎；將所有的細(xì)胞核提取出來(lái),并與鏈霉親和素包被的磁珠混合在一起,其中鏈霉親和素包被的磁珠將牢牢地結(jié)合生物素.再將細(xì)胞核-磁珠懸浮液灌注入一根簡(jiǎn)單的柱子（1ml移液管的軸）.磁珠將會(huì)通過(guò)環(huán)繞在移液管的磁體的磁性作用而保留下來(lái).
④只有細(xì)胞核是來(lái)自植物組織中表達(dá)NTF的細(xì)胞類型時(shí),它們因而才會(huì)被生物素標(biāo)記,將結(jié)合到鏈霉親和素包被的磁珠上.來(lái)自其他細(xì)胞類型的細(xì)胞核將會(huì)被直接沖洗走,這樣就能夠捕獲特定細(xì)胞類型純化的遺傳物質(zhì).