為幫助大家能更深入了解深層過(guò)濾，現(xiàn)已正式上線《深思熟“濾”》系列性深層過(guò)濾知識(shí)課堂，今天為大家?guī)?lái)本系列第四篇內(nèi)容。
采用了深層過(guò)濾技術(shù)誕生的深層過(guò)濾器產(chǎn)品在生物醫(yī)藥行業(yè)有著普遍的應(yīng)用，主要在于料液的澄清和除雜。
除上篇所講述的CHO細(xì)胞發(fā)酵生產(chǎn)單抗的應(yīng)用之外，本篇還將講述LeClafine®的最新案例分享(1)及其他可應(yīng)用的細(xì)胞類型介紹。
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實(shí)驗(yàn)案例分享
1) 案例背景
客戶A利用昆蟲細(xì)胞進(jìn)行豬圓環(huán)滅活疫苗的生產(chǎn)，料液下游純化工藝步驟如下：
?、?料液離心處理
?、?發(fā)酵液澄清過(guò)濾(一般采用深層過(guò)濾等方式)
③ 層析
?、?除菌
2) 挑戰(zhàn)點(diǎn)
由于深層前料液已經(jīng)過(guò)離心，因此濁度一般不高。與CHO細(xì)胞發(fā)酵液不同，其一般采用單級(jí)過(guò)濾。
目前客戶A離心后料液中蛋白濃度一般不高，因此在經(jīng)過(guò)深層過(guò)濾時(shí)應(yīng)更注重在載量和蛋白回收率兩方面，其濾后濁度一般小于50NTU即可(各家要求不同，請(qǐng)區(qū)分看待)。
3) 測(cè)試結(jié)果
采用單級(jí)深層過(guò)濾的方式進(jìn)行除雜澄清，第一次進(jìn)行選型鑒定，第二次進(jìn)行重復(fù)測(cè)試確定結(jié)果。本次以第二次重復(fù)測(cè)試結(jié)果作為展示。(2)
由上表可見(jiàn)，應(yīng)用LeClafine®深層過(guò)濾器相關(guān)料液進(jìn)行過(guò)濾，有較好的除雜效果，且在回收率和載量?jī)煞矫嬗休^好的表現(xiàn)，可以滿足客戶的需求。
LeClafine®已應(yīng)用的細(xì)胞類型一覽(下)
293細(xì)胞
293細(xì)胞是人上皮細(xì)胞系，常見(jiàn)的衍生株如HEK293、293T等，來(lái)源都是人胚胎腎細(xì)胞，較容易轉(zhuǎn)染，是一個(gè)常見(jiàn)的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。
BHK細(xì)胞
BHK細(xì)胞(Baby Hamster Syrian kidney),敘利亞幼地鼠腎細(xì)胞，常用的細(xì)胞為BHK-21，即BHK細(xì)胞系的亞克隆細(xì)胞系，C13。原始的細(xì)胞株是成纖維細(xì)胞，貼壁依賴性。1963年獲得單細(xì)胞克隆細(xì)胞。后經(jīng)無(wú)數(shù)次傳代后細(xì)胞可懸浮生長(zhǎng)，廣泛用于增殖各種病毒，生產(chǎn)獸用疫苗。
口蹄疫疫苗多數(shù)用此細(xì)胞。
MDCK細(xì)胞
MDCK細(xì)胞(madin-darby canine kidney)細(xì)胞系是以馬丁達(dá)比犬腎上皮細(xì)胞為原型演變而來(lái)。因MDCK細(xì)胞與小腸上皮細(xì)胞生理特性類似，而常用于體外藥物吸收特性的研究，且MDCK細(xì)胞培養(yǎng)周期較短，可以更快速的用于抑制劑的篩選及底物的鑒定。
由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易變異，MDCK細(xì)胞系被認(rèn)為適于甲、乙型流感病毒疫苗生產(chǎn)的3種細(xì)胞系之一。
禽流感病毒疫苗多數(shù)用此細(xì)胞。
Marc-145
猴胚胎腎上皮細(xì)胞是上皮樣細(xì)胞，來(lái)源于猴腎細(xì)胞，從母細(xì)胞(MA104細(xì)胞)克隆而得到，可連續(xù)傳代培養(yǎng)。Marc-145細(xì)胞主要用于病毒的培養(yǎng)，特別是豬繁殖與呼吸障礙綜合病毒(PRRSV)對(duì)此細(xì)胞尤為敏感。
豬藍(lán)耳病毒滅活疫苗多數(shù)用此細(xì)胞。
昆蟲細(xì)胞
可用昆蟲細(xì)胞發(fā)酵來(lái)進(jìn)行豬圓環(huán)病毒滅活疫苗的生產(chǎn)。
大腸桿菌
培養(yǎng)大腸桿菌用于重組蛋白或質(zhì)粒的生產(chǎn)。大腸桿菌培養(yǎng)周期短，較容易到達(dá)一個(gè)比較高的數(shù)量級(jí)。
樂(lè)純生物L(fēng)eClafine®深層過(guò)濾器
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