利用斑馬魚模型評價帕金森病防治作用

利用斑馬魚模型評價帕金森病防治作用【評價原理】

帕金森病是一種影響運動能力的退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，一般認為與黑質(zhì)紋狀體的多巴胺能通路破壞有關(guān)。中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元大量死亡可導致多巴胺減少，不能正常傳遞運動信號，乙酰膽堿功能也相對增強，導致帕金森患者出現(xiàn)靜止性震顫和肌肉僵直等典型的運動癥狀。斑馬魚由于體積小、胚胎和早期幼魚透明、神經(jīng)系統(tǒng)在胚胎發(fā)育4天時就已發(fā)育成熟，在胚胎時期就能觀察到完整的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。斑馬魚胚胎透明，能觀察到多巴胺長投射纖維在腦和脊髓的分布，對帕金森病的發(fā)病機制研究有重要作用。6-OHDA是一種能有效導致多巴胺神經(jīng)元變性的神經(jīng)毒劑，廣泛用于動物帕金森模型。諾米芬辛是4一氫異喹啉衍化的三環(huán)類化合物，它抑制多巴胺及NA的攝取，主要是通過抑制多巴胺轉(zhuǎn)運體對生物體起作用。

經(jīng)過行為學分析儀，患有帕金森病的斑馬魚的運動距離明顯減少；經(jīng)過免疫組化染色，患有帕金森病的斑馬魚多巴胺神經(jīng)元面積明顯減少。

利用斑馬魚模型評價帕金森病防治作用【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和服用帕金森病治療藥物組。其中正常對照組未經(jīng)任何處理，模型對照組與陽性對照組都攝入了等量的6-OHDA（6-OHDA通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。帕金森病治療藥物組在攝入6-OHDA的同時攝入諾米芬新之類的帕金森治療藥物。

服用一段時間帕金森治療藥物后，我們用行為學分析儀測定斑馬魚的運動總距離，并對斑馬魚體內(nèi)多巴胺神經(jīng)元進行免疫組化染色，分析多巴胺神經(jīng)元面積變化。

【結(jié)果展示】

圖1. 各實驗組斑馬魚運動總運動距離

與模型對照組比較，*p< 0.05

可以看到，模型對照組斑馬魚的運動總距離與正常對照組相比明顯減少，帕金森病治療藥物組的運動總距離與正常對照組較相似，沒有明顯的減少。

圖2. 帕金森病多巴胺神經(jīng)元免疫組化染色

黃色區(qū)域為定量區(qū)域

可以看到，模型對照組的多巴胺神經(jīng)元面積與正常對照組相比明顯減小，帕金森病治療藥物組的多巴胺神經(jīng)元面積與正常對照組比較相似，沒有明顯的減小。

【評價結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，服用帕金森病治療藥物組的運動總距離、多巴胺神經(jīng)元面積與正常對照組相似，并未出現(xiàn)模型對照組運動總距離明顯減少和多巴胺神經(jīng)元面積明顯減小的情況。

2.本實驗證實了諾米芬新具有防治帕金森病的作用。