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上海仁邦醫(yī)藥科技有限公司
主營產(chǎn)品： 修飾性PEG聚乙二醇，熒光染料，抗體，標準品，醫(yī)藥中間體，化工原料，食品行業(yè)檢測試劑盒及糖標品，ELISA試劑盒，whatman濾膜濾紙，實驗室儀器耗材。 |
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上海仁邦醫(yī)藥科技有限公司
主營產(chǎn)品： 修飾性PEG聚乙二醇，熒光染料，抗體，標準品，醫(yī)藥中間體，化工原料，食品行業(yè)檢測試劑盒及糖標品，ELISA試劑盒，whatman濾膜濾紙，實驗室儀器耗材。 |
2017-5-8 閱讀(3882)
愛爾蘭Megazyme膳食纖維總量檢測
在生命科學領域，上海仁邦醫(yī)藥為業(yè)界提供了豐富的實驗室和生物醫(yī)藥生產(chǎn)研發(fā)的產(chǎn)品。慶祝上海仁邦醫(yī)藥正式成為膳食纖維總量檢測試劑盒 Total Dietary Fibre Assay Kit的 代理商，在這里要感謝廣大客戶多年來對上海仁邦醫(yī)藥科技有限公司的支持和厚愛，我們將一如既往的為廣大客戶帶來膳食纖維總量檢測試劑盒 Total Dietary Fibre Assay Kit高品質(zhì)的產(chǎn)品和服務，歡迎廣大新老客戶。
膳食纖維總量檢測試劑盒 Total Dietary Fibre Assay Kit
規(guī)格：200 assays per kit
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨
膳食纖維是一種多糖，它既不能被消化吸收，也不能產(chǎn)生能量。因此，曾一度被認為是一種“無營養(yǎng)物質(zhì)”。后來發(fā)現(xiàn)了膳食纖維具有相當重要的作用。并被營養(yǎng)學界補充認定為第七類營養(yǎng)素，和傳統(tǒng)的六類營養(yǎng)素——蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素、礦物質(zhì)與水并列。
1.可溶性膳食纖維（來源于果膠、藻膠、魔芋等。魔芋盛產(chǎn)于我國四川等地，主要成分為葡甘聚糖）
2.不可溶性膳食纖維（全谷類糧食，其中包括麥麩、麥片、全麥粉及糙米、燕麥全谷類食物、豆類、蔬菜和水果等。）
膳食纖維是指碳水化合物及其相類似物質(zhì)的總和，包括多糖、寡糖、木質(zhì)素以及相關的植物物質(zhì)。主要有纖維素、半纖維素、果膠及親水膠體物質(zhì)，如樹膠、海藻多糖等組分；另外還包括植物細胞壁中所含有的木質(zhì)素；不被人體消化酶所分解的物質(zhì)，如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纖維素、黏質(zhì)、寡糖以及少量相關成分，如蠟紙、角質(zhì)、軟木脂等。
總膳食纖維檢測試劑盒是根據(jù)AOAC991.43，AOAC 985.29，AACC32-07和AACC 32-05方法開發(fā)的，也適用于其它方法，如AACC Method 32-21，AACC method32-06。
脫脂（如大于10%）干燥后的樣品經(jīng)熱穩(wěn)定a-淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通過乙醇沉淀、過濾，乙醇和丙酮洗滌殘渣后干燥、稱重，得到總膳食纖維（TDF）殘渣；
酶解液通過直接過濾、熱水洗滌殘渣，干燥后稱重，得到不溶性膳食纖維（IDF）殘渣；
濾液用乙醇沉淀，過濾、干燥、稱重，得到可溶性膳食纖維（SDF）殘渣。
TDF、IDF和SDF的殘渣扣除蛋白質(zhì)、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。
該檢測試劑盒的主要優(yōu)勢在于直接提供高純度的酶，酶的活力是標準化的，而標準化的a-淀粉酶的活力在測量抗性淀粉是*的。
淀粉葡萄糖苷酶中基本沒有纖維素酶，而其他常用的酶制劑中常含有這種污染物，這將導致溶解和低估β-葡聚糖。
該試劑盒提供的酶都是穩(wěn)定的液體，可以保存到試劑盒有效期，并且是直接應用液，不需要使用前再溶解。
適用于檢測谷物、水果、蔬菜和加工食品中的總膳食纖維（TDF）、不溶性
膳食纖維（IDF）和可溶性膳食纖維（SDF）的檢測。
每一個盒中的提供的酶試劑足夠進行200個試驗，如另外需要可單獨訂貨：
Bottle 1 ，1瓶：
熱穩(wěn)定a-淀粉酶（20mL，~ 3,000 U/mL，Ceralpha method；~ 10,000 U/mL on
soluble starch。).
Bottle 2，1瓶：
純化的蛋白酶(20mL，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)
Bottle 3，2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL，3300 U/mL on soluble starch。)
總計：80ml（4瓶20ml包裝）
另外，實驗中需要用到硅藻土需要單獨購買。
其他相關試劑盒：
膳食纖維質(zhì)控試劑盒（貨號：K-TSCK）
質(zhì)控試劑盒用于檢驗酶的效力和純度，含下表中所列物質(zhì)每種一瓶，并附有技術數(shù)據(jù)單(K-TSCK)，盒中每種物質(zhì)足夠10次測試用。
| 品種 | 數(shù)量 |
| β-葡聚糖（大麥） | 1.0g |
| 高直鏈玉米淀粉 | 10.0g |
| 淀粉（小麥） | 10.0g |
| 酪蛋白 | 5.0g |
| 果膠 | 1.0g |
5.1 設備
5.2 試劑
(TRIS) (Sigma,T1503)，用1.7L蒸餾水溶解，用6mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH至
8.2±0.1，加水稀釋到2L（注意24℃時PH值為8.2，20℃時PH值為8.3，27-28℃
時PH值為8.1）
后用水定容到1L。
6.1 根據(jù)AACC/AOAC的膳食纖維檢測方法，必須確保酶的純度。
6.1.1 淀粉葡萄糖苷酶被木聚糖酶、纖維素酶和果膠酶污染，會低估β-葡聚糖、
阿拉伯木聚糖和果膠的含量。
6.1.2 熱穩(wěn)定a-淀粉酶被污染，會影響抗性淀粉的測量。
6.1.3 蛋白酶被4-β-葡聚糖酶污染，會低估β-葡聚糖的含量。
6.1.4 如不是使用該酶，請參考下面方法測定。
| Test Sample | Activity Tested | Sample Wt（g） | Expected Recovery (%) |
| Citrus pectin | Pectinasea 『1』 | 0.1 | 90-95 『3』 |
| ß-Glucan (barley) | ß-glucanase (cellulase) 『1』 | 0.1 | 95-100 |
| Wheat starch | Amylase 『2』 | 1.0 | 0-1 |
| Casein | Protease 『2』 | 0.3 | 0-2 |
| High amylose starch | Amylase | 1.0 | ~30 『4』 |
注解：
『1』：沒有酶活力作用。
『2』：zui大酶活力作用
『3』：除很少量的柑橘果膠全部沉淀
『4』：含有大量抗性淀粉，準確回收率的數(shù)值影響熱穩(wěn)定a-淀粉酶的使用量。
6.2 根據(jù)AACC/AOAC的膳食纖維檢測方法，必須對酶標準化測定，如果不是使用該的酶，請按以下方法測定
6.2.1 淀粉葡萄糖苷酶，0.2 mL，
— 酶活力表示方法1：淀粉/葡萄糖酶-過氧化物酶法，3300 U/mL，1個酶活力單位定義為：40°C，PH值4.5時，每分鐘釋放1 μmol葡萄糖所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2：對-硝基苯基-b-麥芽糖苷（PNPBM)法，200 U/mL， 1個酶活力單位（1PNP單位））定義為：40°C，有過量萄糖苷酶存在下，每分鐘從對硝基苯基-β-麥芽糖苷釋放1 μmol 對硝基苯基所需要的酶量。
6.2.2 熱穩(wěn)定a-淀粉酶，0.05 mL，
— 酶活力表示方法1：以淀粉為底物，以Nelson/Somogyi還原糖表示，10000U/mL ，1個酶活力單位定義為：40°C，PH值6.5時，每分鐘釋放1 μmol葡萄糖所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2：對硝基苯基麥芽糖為底物，3,000 U/mL（Ceralpha），1個酶活力單位定義為：40°C，PH值6.5時，每分鐘釋放1 μmol對-硝基苯基所需要的酶量。
6.2.3 蛋白酶，0.10 mL
— 酶活力表示方法1：酪蛋白測試，350 U/mL或50 mg/mL或7 Tyrosine U/mL，1個酶活力單位定義為：40°C，PH值8.0時，每分鐘從可溶性酪蛋白中水解出（并溶于三氯）1 μmol酪氨酸所需要的酶量。
— 酶活力表示方法2：偶氮酪蛋白測試，350 U/mL或50 mg/mL或7 Tyrosine U/mL，1個內(nèi)肽酶活力單位定義為：40°C，PH值8.0時，每分鐘從可溶性酪蛋白中水解出（并溶于三氯）1μmol酪氨酸所需要的酶量。該偶氮酪蛋白(貨號：S-AZCAS).
7.1 試樣制備
準確稱取雙份試樣各1 g，質(zhì)量差小于0.005g，到0.1mg，置于400mL或600mL高型燒杯中，同時制備雙份空白樣，在每個燒杯中加入40 mL PH值8.2的MES-TRIS緩沖液，磁力攪拌，直到試樣*分散到緩沖液中。
7.2 熱穩(wěn)定a-淀粉酶酶解：加入50 μL熱穩(wěn)定a-淀粉酶溶液，加蓋鋁箔，置于95-100°C恒溫振蕩水浴中持續(xù)振搖，當所有燒杯全部放入水浴開始計時，反應35分鐘。
7.3 冷卻：將燒杯取出玲卻到60°C，除去鋁箔蓋，用刮勺將燒杯內(nèi)壁和底部的膠狀物刮下，用10 mL蒸餾水沖洗燒杯壁和刮勺。
7.4 蛋白酶酶解：在每個燒杯中各加入100 μL蛋白酶溶液，加蓋鋁箔，置于60°C恒振蕩水浴中，當燒杯內(nèi)溫度達到60°C開始計時，持續(xù)反應30分鐘。
7.5 PH值調(diào)節(jié)：反應30分鐘后，邊攪拌邊加入0.561 mol/L鹽酸，嚴格控制60°C，用 1mol/L氫氧化鈉溶液或 1mol/L鹽酸溶液，控制PH值在4.5±0.2。
7.6 淀粉葡萄糖苷酶酶解：在上述溶液中邊攪拌邊加入200 μL淀粉葡萄糖苷酶溶液，加蓋鋁箔，置于60°C恒溫振蕩水浴中，持續(xù)振搖，當燒杯內(nèi)溫度達到60°C開始計時，反應30分鐘。
8.1 不溶性膳食纖維測定：
8.1.1 過濾洗滌：試樣酶解液全部轉移到坩堝中過濾，殘渣用10mL預熱到70°C的蒸餾水洗滌兩次，合并過濾液，轉移至另一600mL高腳燒杯中，備測可溶性膳食纖維。殘渣分別用10mL 95%乙醇和丙酮洗滌兩次，抽濾去除洗滌液，將坩堝連同殘渣在103°C烘干過夜，將坩堝置于干燥器中冷卻1小時，稱重（包括坩堝、膳食纖維殘渣和硅藻土），至0.1mg，減去坩堝和硅藻土的干重，計算殘渣質(zhì)量。
8.1.2 蛋白質(zhì)和灰分測定：稱完質(zhì)量的殘渣和硅藻土的混合物，一份用凱氏定氮法，以N×6.25為換算系數(shù)，計算蛋白質(zhì)質(zhì)量。另一份在525°C灰化5小時，于干燥器中冷卻，稱量坩堝總量（至0.1mg）減去坩堝和硅藻土干重，計算灰分質(zhì)量。
8.2 可溶性膳食纖維測定
8.2.1 計算濾液體積：將不可溶性膳食纖維過濾后的濾液收集到600mL的高型燒杯中，通過燒杯+濾液總重扣除燒杯質(zhì)量的方法估算濾液的體積。
8.2.2 沉淀：將濾液加入4倍體積預熱60°C的95%乙醇，或取80g濾液加入320mL預熱60°C的95%乙醇室溫下沉淀1小時。
8.2.3 過濾：在干燥的坩堝中加入1g硅藻土，70°C真空干燥至恒重，記錄坩堝的質(zhì)量（到0.1mg）。用15mL 78%乙醇將硅藻土潤濕，并用真空溶劑過濾裝置在抽真空條件下，使硅藻土平鋪于坩堝中。將樣品酶解液緩慢轉移至對應的坩堝中，抽濾。用刮勺和78%乙醇將所有殘渣轉至坩堝中。
8.2.4 洗滌：分別用15mL 78%乙醇、15mL 95%乙醇和15mL丙酮洗滌殘渣各兩次，抽濾去除洗滌液后，將坩堝連同殘渣在105°C烘干過夜。將坩堝置于干燥器中冷卻1小時，稱重（包括坩堝、膳食纖維殘渣和硅藻土），至0.1mg。減去坩堝和硅藻土的干重，計算殘渣質(zhì)量。
8.2.5 蛋白質(zhì)和灰分測定：稱完質(zhì)量的殘渣和硅藻土的混合物，一份用凱氏定氮法，以N×6.25為換算系數(shù)，計算蛋白質(zhì)質(zhì)量，另一份在525°C灰化5小時，于干燥器中冷卻，稱量坩堝總量（至0.1mg）減去坩堝和硅藻土干重，計算灰分質(zhì)量。
8.3 總膳食纖維檢測檢測
8.3.1 沉淀：在每份試樣中加入預熱至60°C的95%乙醇225mL（預熱后的體積，如乙醇的溫度超過65°C，則加入228mL），乙醇與樣液體積比為4：1，取出燒杯，蓋上鋁箔，室溫下沉淀1小時。建議改為：稱量酶解液的質(zhì)量，用天平加入4倍質(zhì)量的預熱的60°C的95%乙醇，4°C冰箱中沉淀過夜。
8.3.2 過濾：在干燥的坩堝中加入1g硅藻土，70°C真空干燥至恒重，記錄坩堝的質(zhì)量（到0.1mg）。用15mL 78%乙醇將硅藻土潤濕，并用真空溶劑過濾裝置在抽真空條件下，使硅藻土平鋪于坩堝中。將樣品酶解液緩慢轉移至對應的坩堝中，抽濾。用刮勺和78%乙醇將所有殘渣轉至坩堝中。
8.3.3 洗滌：分別用15mL 78%乙醇、15mL 95%乙醇和15mL丙酮洗滌殘渣各兩次，抽濾去除洗滌液后，將坩堝連同殘渣在105°C烘干過夜。將坩堝置于干燥器中冷卻1小時，稱重（包括坩堝、膳食纖維殘渣和硅藻土），至0.1mg。減去坩堝和硅藻土的干重，計算殘渣質(zhì)量。
8.3.4 蛋白質(zhì)和灰分測定：稱完質(zhì)量的殘渣和硅藻土的混合物，一份用凱氏定氮
法，以N×6.25為換算系數(shù)，計算蛋白質(zhì)質(zhì)量。，另一份在525°C灰化5小時，
于干燥器中冷卻，稱量坩堝總量（至0.1mg）減去坩堝和硅藻土
干重，計算灰分質(zhì)量。
DF（%）=『（R1+R2）/2-p-A-B』/『（M1+M2）/2』*100%
式中：
DF=樣品中膳食纖維含量（TDF、IDF、SDF），%
R1 和R2=雙份樣品殘渣的質(zhì)量，單位為毫克（mg）
m1 和m2=雙份樣品的質(zhì)量，單位為毫克（mg）
A=灰分的質(zhì)量，
P=蛋白的質(zhì)量
B=空白=(BR1+BR2）/2-BP-BA
BR1 和BR2=雙份試樣空白殘渣的質(zhì)量
BP=試樣空白蛋白的質(zhì)量
BA=試樣空白灰分的質(zhì)量
可以使用該的計算軟件Mega-CalcTM進行自動計算。
方法二
根據(jù)AACC method 32-05 和AOAC Method 985.29方法測定
b．10±0.5 mL 78 %乙醇
溶解在700mL蒸餾水中，用水定容到1L，用PH計檢查PH值。
移到容量瓶中，用水定容到1L。
到1L。
總膳食纖維的測定必須是低脂或無脂的干燥樣品，取混勻后的樣品于70°C真
空干燥過夜，干燥器中冷卻，再稱重記錄重量損失，干樣粉碎后過0.3-0.5 mm
篩，若試樣不能加熱，則冷凍干燥后再粉碎過篩。如果是高脂肪樣品(> 10 %)，
取經(jīng)過干燥的樣品分別用25mL石油醚脫脂三次，干燥后記錄脫脂的質(zhì)量損失，
zui后計算總膳食纖維含量時進行進行校正，粉碎過篩后的干燥試樣放在干燥
器中待用。
準確稱取雙份試樣各1 g，質(zhì)量差小于0.005g，到0.1mg，置于400mL或
600mL高型燒杯中，同時制備雙份空白樣，在每個燒杯中加入50 mL PH值6.0
的磷酸鹽緩沖液，磁力攪拌，直到試樣*分散到緩沖液中，控制PH值6.0±0.1。
4.2 熱穩(wěn)定a-淀粉酶酶解：加入50 μL熱穩(wěn)定a-淀粉酶溶液，加蓋鋁箔，置于沸騰
水浴中15分鐘，每5分鐘輕輕振蕩一次。當燒杯內(nèi)的溫度到100°C開始計時，
總共大約30分鐘。
4.3 冷卻：將燒杯取出冷卻到室溫，加入10 mL 0.275mol/L 的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)
PH值在7.5±0.1。
4.4 蛋白酶酶解：在每個燒杯中各加入100 μL蛋白酶溶液，加蓋鋁箔，置于60°C
恒振蕩水浴中，當燒杯溫度達到60°C開始計時，持續(xù)反應30分鐘。
4.5 冷卻：加入10 mL 0.325 mol/L鹽酸，調(diào)節(jié)PH值在4.5±0.2。
4.6 淀粉葡萄糖苷酶酶解：在上述溶液中邊攪拌邊加入200 μL淀粉葡萄糖苷酶溶
液，加蓋鋁箔，置于60°C恒溫振蕩水浴中，持續(xù)振搖，當燒杯內(nèi)溫度達到60°C
開始計時，反應20分鐘。
4.7 在每份試樣中加入預熱至60°C的95%乙醇280mL（預熱前的體積），乙醇與樣
液體積比為4：1，取出燒杯，蓋上鋁箔，室溫下沉淀1小時。
4.8 過濾：在干燥的坩堝中加入1g硅藻土，70°C真空干燥至恒重，記錄坩堝的質(zhì)
量（到0.1mg）。用15mL 78%乙醇將硅藻土潤濕，并用真空溶劑過濾裝置
在抽真空條件下，使硅藻土平鋪于坩堝中。將樣品酶解液緩慢轉移至對應的
坩堝中，抽濾。用刮勺和78%乙醇將所有殘渣轉至坩堝中。
4.9 洗滌：分別用20mL 78%乙醇洗滌3次、10mL 95%乙醇和10mL丙酮洗滌殘渣
各兩次，抽濾去除洗滌液后，將坩堝連同殘渣在105°C烘干過夜或70°C真空
干燥過夜。將坩堝置于干燥器中冷卻1小時，稱重（包括坩堝、膳食纖維殘渣
和硅藻土），至0.1mg。減去坩堝和硅藻土的干重，計算殘渣質(zhì)量。
4.10 蛋白質(zhì)和灰分測定：稱完質(zhì)量的殘渣和硅藻土的混合物，一份用凱氏定
氮法，以N×6.25為換算系數(shù)，計算蛋白質(zhì)含量。另一份在525°C灰化5小時，
于干燥器中冷卻，稱量坩堝總量（至0.1mg）減去坩堝和硅藻土干重，
計算灰分質(zhì)量。
計算：
未校正的平均空白殘渣 (UABR)=平均試樣空白殘渣質(zhì)量，單位為毫克
未校正空白蛋白殘渣(BPR)=UABR x %空白蛋白/100
未校正空白灰分殘渣(BAR)=UABR x %空白灰分/100
校正的空白(CB)= UABR – BPR – BAR
未校正的平均樣品殘渣 (USAR)=平均試樣空白殘渣質(zhì)量，單位為毫克
未校正樣品蛋白殘渣(SPR)=UABR x %空白蛋白/100
未校正樣品灰分殘渣(SAR)=UABR x %空白灰分/100
校正的樣品(CSR)= USAR-SPR-SAR-CB% TDF= 100 x CSR/樣品質(zhì)量mgzui終的% TDF是去除了和水分后的總膳食纖維含量。
10、參考文獻：
foods and food products. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 71:1017.16
Total Dietary Fiber Assay Kit
The Total Dietary Fiber test kit is suitable is suitable for the measurement and analysis of Total Dietary Fiber.
For the determination of Total Dietary Fiber in cereal products,
foodstuffs, feeds and other materialsPrinciple:
(α-amylase + amyloglucosidase)
(1) Starch + H2O → D-glucose(protease)
(2) Protein + H2O → peptides(3) Dietary fiber determined gravimetrically following alcohol
precipitation
(4) Ash and residual protein determined on DF residues
and subtracted
Kit size: 100 / 200 assays
Method: Hydrolysis / removal of non-dietary
fibre components
Total assay time: ~ 100 min
Detection limit: 0.5-100% of sample weight
Application examples:
Food ingredients, food products and other materials
Method recognition:
AOAC (Methods 985.29, 991.42, 991.43 and 993.19), AACC
(Methods 32-05.01, 32-06.01, 32-07.01 and 32-21.01) and
CODEX (Type I Method)
Total Dietary Fiber Assay Kit, for the measurement and analysis of total, soluble and insoluble dietary fiber according to AOAC and AACC approved methods. See General Referee Reports: Journal of AOAC INTERNATIONAL, Vol. 81, No. 1, 1998.
Fiber is a mixture of complex organic substances, including hydrophilic compounds, such as soluble and insoluble polysaccharides and non-digestable oligosaccharides, as well as a range of non-swellable, more or less hydrophobic, compounds such as cutins, suberins and lignins. The procedures for the determination and analysis of total dietary fiber as outlined in our booklet are based on the methods of Lee et al.1 and Prosky et al.2,3 (AOAC 991.43, AOAC 985.29, AACC 32-07.01 and AACC 32-05.01). However, the enzymes in the Megazyme Total Dietary Fiber Kit can also be used in other dietary fiber analytical methods such as AACC Method 32-21.01 and AACC Method 32-06.01.
1. Association of Official Analytical Chemists. (1985). Official Methods of Analysis, 14th ed., 1st suppl. Secs. 43, A14-43, A20, p.399.
2. Association of Official Analytical Chemists. (1986). Changes in methods. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 69, 370.
3. Association of Official Analytical Chemists. (1987). Changes in methods. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 70, 393.
Two separate methods are described in the associated data booklet:
METHOD 1:
DETERMINATION OF TOTAL, SOLUBLE AND INSOLUBLE DIETARY FIBER
Based on AOAC Method 991.43 “Total, Soluble, and Insoluble Dietary Fiber in Foods” (First Action 1991) and AACC Method 32-07.01 “Determination of Soluble, Insoluble, and Total Dietary Fiber in Foods and Food Products” (Final Approval 10-16-91).
METHOD 2:
DETERMINATION OF TOTAL DIETARY FIBER
Based on AACC method 32-05.01 and AOAC Method 985.29.
Advantages
