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百日咳IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
1. 名稱
通用名：百日咳 IgG試劑盒 (定量)     
英文名：Bordetella Pertussis IgG (quant.)
商品名：賽潤(rùn)ELISA classic 百日咳 IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
漢語(yǔ)拼音：Serion ELISA classic Bairike IgG kangti dingliang jiance shijihe (meilian mianyifa)   
2．用途
用于定量測(cè)定人血清、腦脊液或血漿中的抗百日咳桿菌抗體。
3. 診斷意義  
賽潤(rùn)ELISA classic 百日咳 IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）用于定量檢測(cè)人血清和血漿中抗百日咳桿菌的抗體。該試劑可用于百日咳急性感染或近期感染的診斷及流行病學(xué)研究，IgG-ELISA試劑則用于監(jiān)控疫苗的接種情況。 
 
對(duì)于IgM抗體的檢測(cè)，百日咳細(xì)胞表面的脂多糖具有明顯的診斷學(xué)特征，而PT和FHA在這里并不適用6，因此利用賽潤(rùn)ELISA classic百日咳IgM試劑進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，應(yīng)使用百日咳的全細(xì)胞來(lái)制備抗原。  
 
百日咳血清學(xué)檢測(cè)還不能代替作為最終診斷依據(jù)的病原體分離，它是對(duì)病原體分離檢測(cè)的一個(gè)補(bǔ)充。 
 
其他細(xì)菌例如副百日咳、流感（嗜血）桿菌、粘膜炎莫拉菌、肺炎支原體、沙眼衣原體或某些病毒如呼吸道合胞體病毒和腺病毒等也能引起類似百日咳的病癥。 
4. 說(shuō)明
本說(shuō)明書除百日咳IgG抗體定量檢測(cè)的內(nèi)容外，還涉及到IgM/IgA抗體的定量檢測(cè)，以及對(duì)結(jié)果的分析等。
 
5. 賽潤(rùn)ELISA classic - 檢驗(yàn)原理 
 
用抗原包被微量板孔，制成固相載體。加患者血清到板孔中，其所含的抗體特異性地與固相載體中現(xiàn)存抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。除去多余物質(zhì)后，加入結(jié)合了堿性磷酸酶的IgG、IgA或IgM抗體，使之與上述免疫復(fù)合物反應(yīng)。洗板，除去多余的結(jié)合物，加入底物（對(duì)硝基苯磷酸鹽）。其與酶結(jié)合的免疫復(fù)合物反應(yīng)，產(chǎn)生有顏色產(chǎn)物，顏色強(qiáng)度與特異性抗體含量成正比。 
 
 6. 試劑盒的組成 
 
試劑盒組成    IgG試劑盒  IgM試劑盒 IgA試劑盒  
數(shù)量 / 容積 
微孔條（此微孔條可拆下單獨(dú)使用，每條有8孔，共96孔，已經(jīng)包被了抗原） 
1個(gè)微孔條框架 
包被材料未被激活     12           12          12 
標(biāo)準(zhǔn)血清（立即可用） 
人血清溶于含蛋白的磷酸鹽緩沖液；抗HIV抗體、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗體均為陰性； 
防腐劑：< 0.1% 疊氮化吶  
染色劑：紫紅色O     2×2毫升    2×2毫升   2×2毫升
陰性對(duì)照血清（立即可用） 
人血清溶于含蛋白的磷酸鹽緩沖液；抗HIV抗體、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗體均為陰性； 
防腐劑：< 0.1% 疊氮化吶  
染色劑：里沙明綠 V     1×2毫升    1×2毫升   1×2毫升
酶標(biāo)記的抗人IgG, IgA, IgM （立即可用） 
羊抗人IgG, IgA, IgM（多克隆），標(biāo)記堿性磷酸酶后在蛋白穩(wěn)定劑中儲(chǔ)存 
防腐劑: 0.01% 甲基異噻唑啉酮 
 0.01% 溴化硝基二堊烷     13毫升      13毫升      13毫升 
濃縮洗液（可稀釋至1000毫升） 
氯化鈉溶液，含吐溫20和30mM Tris  
防腐劑： < 0.1%疊氮化吶     1×33.3毫升1×33.3毫升 1×33.3毫升 
稀釋緩沖液 
磷酸鹽緩沖液，內(nèi)含蛋白和吐溫20 
防腐劑： < 0.1%疊氮化吶 
0.01克 /升的溴酚藍(lán)鈉鹽     2×50毫升    2×50毫升  2×50毫升
終止液 
1.2N 氫氧化鈉     15毫升      15毫升      15毫升 
底物（立即可用） 
對(duì)硝基苯磷酸鹽，不含其它溶劑的緩沖液 
防腐劑：< 0.1% 疊氮化吶 
（未開封瓶子中的底物可能會(huì)輕微變黃，但不會(huì)影響其質(zhì)量）     13毫升      13毫升      13毫升 
帶有標(biāo)準(zhǔn)曲線和評(píng)估表的質(zhì)量控制文件 
（抗體以IU/毫升或U/毫升計(jì)量）     1             1           1 
7. 其它檢測(cè)所需物質(zhì) 
 
-  普通實(shí)驗(yàn)室所需的儀器裝置 
-  IgM檢測(cè): 另需賽潤(rùn)含對(duì)照抗原的賽潤(rùn)類風(fēng)濕因子Rf -吸附劑（產(chǎn)品編號(hào)Z100/5ml和Z200/20ml）  
-  分光光度計(jì)，波長(zhǎng)405納米，建議參考波長(zhǎng)范圍620納米- 690納米（例如 650納米） 
-  37℃溫箱 
-  濕盒 
-  蒸餾水。 
 
8. 儲(chǔ)存及穩(wěn)定性 
有效期內(nèi)
9. 賽潤(rùn) ELISA classic的檢驗(yàn)步驟 
9.1 注意事項(xiàng) 
 
只有全部使用賽潤(rùn) ELISA classic試劑才能保證檢測(cè)效果，因?yàn)樗性噭┒际怯嘘P(guān)聯(lián)的，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。尤其是標(biāo)準(zhǔn)血清，對(duì)照血清以及酶標(biāo)記物，必須使用試劑盒配備的，不要使用其它批號(hào)產(chǎn)品。稀釋緩沖液，洗液，終止液和底物溶液可用于所有賽潤(rùn) ELISA classic試劑盒。 
 
ELISA classic試劑盒內(nèi)所有試劑均必須正確地存放。應(yīng)在未開封的情況下，保存于2-8℃，并在有效期（見(jiàn)標(biāo)簽說(shuō)明）內(nèi)使用。詳細(xì)的穩(wěn)定性和儲(chǔ)存資料在“8. 儲(chǔ)存及穩(wěn)定性"內(nèi)將加以詳述。 
 
每一種試劑都是經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)以保證優(yōu)的檢測(cè)結(jié)果。這些試劑如果未經(jīng)規(guī)定被稀釋或改動(dòng)都會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的敏感性的降低。 
 
在儲(chǔ)存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。 
 
請(qǐng)從標(biāo)記處剪開密封袋。如果鋁袋破損或者開啟裝有干燥劑的鋁袋后而未以?shī)A子封緊的，則不要繼續(xù)使用微孔條。 
 
開始試驗(yàn)前，將所有試劑置于室溫。 
 
從試劑管中吸取試劑的時(shí)候，應(yīng)注意使用無(wú)菌技術(shù)以防污染。為避免假陽(yáng)性結(jié)果，吸加酶結(jié)合物時(shí)，吸嘴應(yīng)確保不接觸或噴灑于小孔的外面，注意不要蓋錯(cuò)瓶蓋或管蓋。 
 
試驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性依賴于充分混勻試劑。使用前振蕩裝有對(duì)照血清的小管和所有稀釋過(guò)的溶液（例如使用混合器）。 
 
小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 對(duì)照血清，酶結(jié)合物或底物時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。 
只有嚴(yán)格遵守賽潤(rùn)ELISA classic試劑的試驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到優(yōu)的檢測(cè)結(jié)果。 
 
如果實(shí)驗(yàn)中未嚴(yán)格遵守控制質(zhì)量控制認(rèn)證文件上的有效性特異準(zhǔn)則，則試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效。 
 
洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果： 
 
應(yīng)該小心進(jìn)行洗滌。洗滌步驟應(yīng)遵守相關(guān)洗滌器（平底孔，孔直徑7毫米，深10.9毫米）指導(dǎo)手冊(cè)進(jìn)行。重要的是所有的孔內(nèi)均應(yīng)加入相同體積的洗滌緩沖液。洗滌結(jié)束時(shí)，應(yīng)將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，以確保所有孔內(nèi)均無(wú)洗滌緩沖液。避免產(chǎn)生泡沫！如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，注意正確操作。 
 
9.2 檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作和儲(chǔ)存 
避免使用高血脂、溶血或黃疸的標(biāo)本，盡管在我們的檢測(cè)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有副影響。明顯被污染的標(biāo)本（血清或血漿）不能用于檢測(cè)。 
樣品不應(yīng)加熱滅活。 
 
9.2.1 樣品準(zhǔn)備 
開始試驗(yàn)前，患者的待測(cè)樣品必須以稀釋緩沖液稀釋如下（V1+V2）： 
 
V1+V2=1+100       加    10微升   患者待測(cè)樣品 
                   于   1000微升   稀釋緩沖液 
稀釋后及加入微孔板前，樣品必須充分混勻。