這個檢測方法依靠單克隆抗體來識別17β-Estradiol。樣品中的17β-Estradiol和一個17β-Estradiol-酶結(jié)合物預(yù)先混合然后加入到每個微孔中競爭與包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中17β-Estradiol的濃度如果高于17β-Estradiol -酶結(jié)合物，17β-Estradiol將主要與抗體結(jié)合。反之樣品中17β-Estradiol的濃度如果低于于17β-Estradiol -酶結(jié)合物，17β-Estradiol -酶結(jié)合物將主要與抗體結(jié)合。通過洗滌步驟去除沒有反應(yīng)的17β-Estradiol和過量的17β-Estradiol -酶結(jié)合物。和微孔板中抗體結(jié)合的17β-Estradiol -酶結(jié)合物催化底物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過一個孵育期用烯酸終止反應(yīng)。樣品中17β-Estradiol的濃度越高導(dǎo)致結(jié)合到微孔板抗體上的17β-Estradiol -酶結(jié)合物越少，從而產(chǎn)生的顏色越淡，吸光度越低。利用已知濃度的17β-Estradiol標準的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應(yīng)曲線（標準曲線）。把樣品的吸光度值用內(nèi)插法插入到標準曲線中可以精確的計算出樣品中BPA的濃度。