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Attune® NxT 聲波聚焦流式細(xì)胞儀
讓您的靈感成為現(xiàn)實
Attune® NxT 聲波聚焦流式細(xì)胞儀采用了模塊設(shè)計，能夠配置至多4種激光和14色熒光檢測，適用于多參數(shù)分析，可滿足大多數(shù)實驗設(shè)計和實驗室預(yù)算要求 申請試用 詢價 |
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采用模塊設(shè)計進行多色分析
Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀采用了模塊設(shè)計，能夠配置至多4種激光和14色熒光檢測，適用于多參數(shù)分析 (圖1)，可滿足大多數(shù)實驗設(shè)計和實驗室預(yù)算要求。Attune® NxT流式細(xì)胞儀能夠兼容流式細(xì)胞儀中的熒光基團和熒光蛋白，可以與您目前運行的檢測板匹配 (表1)。采用可選的561 nm激光還可檢測多種熒光蛋白 (圖2)。
圖1. 采用Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀對小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞進行多參數(shù) (10色) 分析。 采用FSC/SSC參數(shù) (A，左) 對淋巴細(xì)胞設(shè)門，在后續(xù)分析中除去表達B220的B細(xì)胞 (A，中)。在B220–、CD45.2+設(shè)門范圍內(nèi)，根據(jù)CD3表達水平分析T細(xì)胞 (A，右)。根據(jù)輔助受體CD4或CD8 (B，左) 的表達水平將CD3+ T細(xì)胞分成兩個群體。在CD4+ T細(xì)胞中，有一種抑制性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群可以表達轉(zhuǎn)錄因子Foxp3和細(xì)胞表面標(biāo)記物CD25 (IL-2Rα) (B，右)。.CD3–細(xì)胞中有少量CD11c+ MHCII+群體，它們是專業(yè)的抗原提呈樹突狀細(xì)胞(C，左)。脾臟樹突狀細(xì)胞可以進一步分為CD11b+和CD8+樹突狀細(xì)胞亞群 (C，右)，分別具有不同的抗原提呈特性。
| 圖2. 活細(xì)胞熒光蛋白檢測。 采用CellLight®細(xì)胞核-GFP (貨號：C10602) 和CellLight®質(zhì)膜-RFP (貨號：C10608) 同時轉(zhuǎn)導(dǎo)U-2 OS細(xì)胞。采用Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞，儀器使用488 nm激光和530/30發(fā)射濾光片及561 nm激光和585/16 nm發(fā)射濾光片。 |
表1. Attune® NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀熒光基團選擇指南。
| Excitation Laser | Emission Filter (nm) | Channel | Recommended Dyes | Fluorescent Proteins |
|---|---|---|---|---|
| Violet–405 nm | 440/50 | VL1 | Alexa Fluor® 405 Pacific Blue™ | Sirius Azurite eCFP eBFP mTarquoise Cerulean |
| 512/25 | VL2 | Pacific Green™ | vGFP | |
| 603/48 | VL3 | Pacific Orange™ Qdot® 605 | ||
| 710/50 | VL4 | Qdot® 705 | ||
| Blue–488 nm | 530/30 | BL1 | Alexa Fluor® 488 FITC | eGFP Emerald eYFP |
| 590/40 | BL2 | PE-Alexa Fluor® 610 PE-Texas Red® PE | ||
| 695/40 | BL3 | PE-Alexa Fluor® 700 Tri-Color® PE-Cy®5.5 PerCP PerCP-Cy®5.5 Qdot® 705 | ||
| Yellow–561 nm | 585/16 | YL1 | PE | mOrange RFP dTomato |
| 620/15 | YL2 | PE- Alexa Fluor® 610 PE-Texas Red® | mCherry DsRed mKate mStrawberry | |
| 695/40 | YL3 | PE-Alexa Fluor® 700 PE-Cy®5.5 Qdot® 705 Tri-Color® | ||
| 780/60 | YL4 | PE-Cy®7 Qdot® 800 | ||
| Red–637 nm | 670/14 | RL1 | APC Alexa Fluor® 647 Qdot® 655 | |
| 720/30 | RL2 | Alexa Fluor® 680 Alexa Fluor® 700 APC-Alexa Fluor® 700 Qdot® 705 | ||
| 780/60 | RL3 | APC-Alexa Fluor® 750 APC-Cy® 7 Qdot® 800 |
*不包括適用于PE的黃色激光 (590/40)。
**可以任選各色激光進行側(cè)向散射分析(默認(rèn)為藍色激光)。紫色激光側(cè)向散射推薦用于無洗脫/裂解應(yīng)用。
在各種進樣速率下的精度和靈敏度
Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀可以在您需要時提供更高的靈敏度。即便是在1,000 μL/分鐘的高進樣速率下，您也可以維持精確的聚焦。聲波聚焦提供的精確聚焦使研究人員能夠獲得更小的CV值，更好地鑒別模糊信號和背景，從而減少差異，改善信號分離效果 (圖3)。
| 圖3. 不同流速下的靈敏度檢測。在(A) 的傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀和(B和C) Attune®NxT聲波聚焦細(xì)胞分析儀上，采用561 nm激光和(A) 610/20或(B和C) 610/15發(fā)射濾光片，運行熒光微球 (Spherotech Rainbow校準(zhǔn)微粒，3.2 μm)。傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀是在的靈敏度設(shè)置下運行 (~12.5 μL/分鐘)。Attune® NxT流式細(xì)胞儀采用了2種不同的設(shè)置運行：(B) 12.5 μL/分鐘，與傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀相同，以及 (C) 500 μL/分鐘，進樣量高40x。即便是在流速下，Attune® NxT流式細(xì)胞儀亦可提供相當(dāng)或更佳的結(jié)果。 |
地減小數(shù)據(jù)差異
細(xì)胞周期分析是必須精確檢測多個細(xì)胞群體之間的熒光強度差異的實例之一。采用Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀，不論樣本進樣速率如何變化，都可以地減小結(jié)果的差異。您無需再通過放棄通量而獲得靈敏度 (圖4)。
| 圖4. 采用Attune®NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀，可在高進樣速率下地減小數(shù)據(jù)差異。 對Jurkat細(xì)胞進行固定，RNA酶處理，并用碘化丙啶（PI）染色，制成濃度為1 x 106個細(xì)胞/mL的溶液，以不同的進樣速率在Attune® NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀上進行分析。所有圖上左側(cè)的峰反映G0/G1期的細(xì)胞，右側(cè)的峰反映G2/M期的細(xì)胞。不論進樣速率如何，Attune® NxT流式細(xì)胞儀上G0/G1和G2/M峰的寬度以及CV%都很穩(wěn)定，即便是在1,000 μL/分鐘的進樣速率下也是如此。 |
| 進樣速率 (μL/分鐘) | 12.5 | 25 | 100 | 200 | 500 | 1,000 |
| G1 CV% | 2.99 | 3.03 | 2.76 | 2.94 | 2.70 | 2.96 |
| G1//G2 | 1.99 | 1.99 | 1.99 | 2.05 | 2.05 | 2.03 |
快速檢測稀有細(xì)胞
少量細(xì)胞群體的分析需要多次采集才能獲得準(zhǔn)確且值得信賴的結(jié)果，這導(dǎo)致其采集時間較長。Attune® NxT聲波聚焦流式細(xì)胞儀的樣本運行速率比其他流式細(xì)胞儀快10倍——達1,000 μL/分鐘，每次運行能采集2 x 107次，可以快速且準(zhǔn)確地檢測稀有細(xì)胞，且不影響數(shù)據(jù)質(zhì)量 (圖5)。
| 圖5. >100萬活細(xì)胞的采集和少量 (0.2%) 樹突狀細(xì)胞群的檢測。漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞 (pDCs) 是一種特殊的細(xì)胞群，它們在病毒的刺激下可產(chǎn)生大量的I型干擾素，可根據(jù)免疫表型CD19–/B220高/CD317+進行鑒定。利用CD19-Pacific Blue™、CD317-Alexa Fluor® 488、CD45R/B220-PE直標(biāo)抗體以及SYTOX® AADvanced™ 死細(xì)胞染料對小鼠脾細(xì)胞進行四色染色。采用SYTOX®AADvanced™ 死細(xì)胞染料在活細(xì)胞中設(shè)門，然后在CD19–細(xì)胞中設(shè)門。采用CD45R/B220與CD317雙參數(shù)曲線鑒定pDC。利用500 μL/分鐘的采集速度，獲得130萬個總細(xì)胞，細(xì)胞濃度為7.5 x 107個細(xì)胞/mL。漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞被鑒定為雙B220+/CD317+ (右上象限)，占CD19–活細(xì)胞的0.851%，全部脾細(xì)胞的0.194%。 |
稀釋樣本，但不影響數(shù)據(jù)質(zhì)量
洗脫并裂解紅細(xì)胞 (RBC) 會造成嚴(yán)重的細(xì)胞損失和損傷。的樣本采集速率使得Attune® NxT流式細(xì)胞儀能夠提供無需洗脫/裂解的實驗方案，地避免了細(xì)胞損失，簡化了樣本制備 (圖6)。該特性尤其適用于那些濃度較低的樣本，諸如腦脊液 (CSF)、干細(xì)胞及細(xì)胞數(shù)量較少的稀釋樣本，這些樣品分析的采集時間通常較長。采用Attune® NxT流式細(xì)胞儀，即便是稀釋樣本，亦可快速采集，且不影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。可以對諸如小鼠血液和骨髓等難以采集的樣本、細(xì)針抽吸樣本或低細(xì)胞產(chǎn)量的樣本直接進行熒光標(biāo)記然后稀釋進樣，無需洗脫或進行紅細(xì)胞裂解。在高樣本采集速率下可輕松實現(xiàn)采集——您可在四分鐘內(nèi)運行至多4 mL樣本。這種樣本制備過程不會出現(xiàn)樣本損失，且可對所有珍貴樣本進行全面檢測。
圖6. 無需樣本制備，且不影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。采用抗體染色五微升全血，孵育，并使用4 mL緩沖液進行稀釋，在Attune®NxT流式細(xì)胞儀上分析。紅細(xì)胞可以吸收405 nm光線，可實現(xiàn)如中圖所示的側(cè)向散射的差異化設(shè)門，在該圖中，采用405 nm與488 nm側(cè)向散射雙參數(shù)曲線區(qū)分白細(xì)胞和紅細(xì)胞群體。在該群體中，可采用前向散射與側(cè)向散射子曲線圖鑒別淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞群體，無需熒光標(biāo)示。
符合您的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)的軟件
Attune®NxT軟件采用直觀且易于使用的界面，能提供強大的數(shù)據(jù)采集和分析功能 (圖7)。您可以方便地建立、自定義并保存實驗供將來研究之用。自動進行補償，并可根據(jù)補償指南進行設(shè)置。
分析軟件為數(shù)據(jù)分析大化設(shè)計，其對較大的數(shù)據(jù)組的刷新速度快 (高達2,000萬次/樣本)，當(dāng)您作出調(diào)整時，能夠立即顯示于數(shù)據(jù)曲線上。軟件采用的工具簡化了實驗設(shè)置，包括利用濾光片配置管理器進行試劑選擇。您可以從預(yù)置或定制試劑下拉菜單中選擇試劑，根據(jù)儀器上的優(yōu)化通道匹配適當(dāng)?shù)脑噭缓髴?yīng)用于曲線標(biāo)志。
圖7. Attune® NxT軟件界面。
訂購信息
| 激光 | 激光顏色 | 檢測參數(shù) | 貨號 | 訂購信息 |
| 4 | 藍色、紅色、黃色、紫色 | 16 | A24858 | 詢價 |
| 3 | 藍色、紫色、黃色 | 13 | A24859 | 詢價 |
| 3 | 藍色、紅色、紫色 | 13 | A24860 | 詢價 |
| 2 | 藍色、黃色 | 9 | A24861 | 詢價 |
| 2 | 藍色、紫色 | 10 | A24862 | 詢價 |
| 2 | 藍色、紅色 | 9 | A24863 | 詢價 |
| 1 | 藍色 | 6 | A24864 | 詢價 |
Attune® 聲波聚焦細(xì)胞分析儀只能用于實驗研究 不得用于人或動物的治療或診斷用途。
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