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抗體酵母展示技術(shù)服務平臺

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更新時間：2023-10-17 17:21:35瀏覽次數(shù)：231次

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泰克生物科技（天津）有限公司

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產(chǎn)品簡介

產(chǎn)地	國產(chǎn)	級別	化工級

泰克生物著力于為客戶提供高質(zhì)量，且具性價比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術(shù)服務。我們在藥物抗體發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項目開發(fā)經(jīng)驗和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗。

詳細介紹

泰克生物著力于為客戶提供高質(zhì)量，且具性價比的抗體藥物前期發(fā)現(xiàn)技術(shù)服務。我們在藥物抗體發(fā)現(xiàn)方面擁有10年的項目開發(fā)經(jīng)驗和心得，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗?；诮湍阁w展示技術(shù)（Yeast Display Technology）平臺的服務，泰克生物能夠為客戶提供一系列包括但不限于兔源、鼠源、羊源、駝源等不同物種的單克隆抗體制備服務，及其配套的完整可追溯性文件體系。

酵母抗體展示技術(shù)（Yeast Display Technology）是指用抗體序列可變區(qū)與凝集素Aga2p融合表達，Aga2p蛋白亞基通過兩個二硫鍵與固定在酵母細胞壁上的Aga1p 蛋白亞基結(jié)合，結(jié)合流式分選技術(shù)，將靶向抗原的特異性抗體給篩選出來。

█ 酵母展示抗體文庫構(gòu)建服務

泰克生物可為客戶提供來自駝源VHH納米抗體庫，以及其他物種scFv形式抗體的酵母展示文庫構(gòu)建及篩選服務。VHH納米抗體庫，又稱為駝源重鏈抗體文庫，抗體分子量大小為15kDa，是駝源動物產(chǎn)生的一種抗體。酵母抗體文庫展示體系受限于自身物理特性限制，物理庫容滴度一般<10⁷，因此主要應用于客戶對項目庫容要求不高，動物免疫后PBMC細胞經(jīng)過二次分選以及避免漏掉二硫鍵形成的抗體發(fā)現(xiàn)項目。同時酵母展示文庫相對噬菌體展示文庫技術(shù)而言，前者在微量抗體表達后抗體活性層面相較于后者要高，得益此基礎，在流式篩選時就能區(qū)分抗體的親和力高低。

目前被廣泛應用于CAR-T/CAR-NK治療性抗體，主要以駝源VHH抗體（又被稱為納米抗體）發(fā)現(xiàn)為主，VHH/scFv抗體酵母展示發(fā)現(xiàn)路徑如圖1所示：

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圖1基于酵母技術(shù)平臺的VHH/scFv抗體發(fā)現(xiàn)服務

█ 服務內(nèi)容和周期

步驟	服務內(nèi)容	QC標準	周期
Step1:蛋白表達	(1) 密碼子優(yōu)化+基因模板合成+表達載體構(gòu)建； (2) 質(zhì)粒抽提+轉(zhuǎn)染（哺乳表達系統(tǒng)）目的蛋白檢測（WB，SDS-PAGE）； (3) 蛋白表達放大+蛋白親和純化；	交付：表達載體，克隆甘油菌，重組蛋白3-3.5mg，純度>85%，標準實驗報告	4-6周
Step2:動物免疫	(1) 動物免疫4次，加強免疫一針，共計免疫5針； (2) 免疫前采集陰性血清，第4針采血進行ELISA檢測血清效價； (3) 若第4針血清抗體效價（蛋白抗原>10⁵；多肽抗原>10⁴）滿足要求，則采血前7天再次加強免疫1針，如不滿足要求，則繼續(xù)常規(guī)免疫； (4) 效價合格，采血分離單核細胞；	動物：背景清晰（年齡，性別，防疫情況）；免疫：蛋白抗原>10⁵；多肽抗原>10⁴；采血：數(shù)量100ml以上； PBMC細胞：>10⁵/vial	8-10周
Step3:模板cDNA制備	(1) PBMC總RNA提?。≧NA提取試劑盒） (2) 高保真RT-PCR制備cDNA（反轉(zhuǎn)錄試劑盒）	cDNA：反轉(zhuǎn)后>1ug/ul，膠圖分布均勻； cDNA模板總量>150ug；	1 天
Step4:抗體酵母展示文庫構(gòu)建	(1) 以cDNA為模板，兩輪PCR擴增VHH基因酵母表達質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化： VHH基因拼接酵母展示載體，電擊轉(zhuǎn)化酵母宿主菌，構(gòu)建抗體庫，電擊次數(shù)不低于10次鑒定：隨機挑選24個克隆，PCR鑒定陽性率+PCR鑒定多樣性+插入率	文庫陽性率：>90%；文庫插入性率：>90%；庫容：>10⁶	1-2周
Step5:文庫篩選（磁珠+Facs）	(1) 磁珠分選； (2) FACS分選（免疫雙標分選）； (3) 鋪板+陽性克隆菌培養(yǎng)+抗體基因測序；（>20個，多達96個）；	陽性標準：雙陽性菌株； VHH篩選標準：CDR氨基酸序列不同	2-3周
Step6:抗體驗證（體外驗證）	(1) 將獲得的抗體序列構(gòu)建合適的表達載體進行表達+親和純化+抗體蛋白定量； (2) Elisa驗證抗體與抗原結(jié)合，進行下游驗證（交付EC50數(shù)據(jù)）; (3) BLI法驗證抗體親和力； (4) 細胞功能驗證：流式驗證； (5) 驗證細胞系（抗原受體過表達細胞系）；	交付：表達載體，克隆菌株，表達菌株，重組抗體蛋白1mg，純度90%；快速親和力測定結(jié)果；	4-6周