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色譜對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的柱色譜法
閱讀:254 發(fā)布時(shí)間:2022-8-28 色譜對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的所用色譜管為內(nèi)徑均勻、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管,下端用棉花或玻璃纖維塞住,管內(nèi)裝有吸附劑。色譜柱的大小,吸附劑的品種和用量,以及洗脫時(shí)的流速,均按各單體中的規(guī)定。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻,以保證良好的分離效果,除另有規(guī)定外通常多采用直徑為0.07-0.15mm的顆粒。吸附劑的活性或吸附力對(duì)分離效果有影響,應(yīng)予注意。
吸附劑的填裝 干法:將吸附劑一次加入色譜管,振動(dòng)管壁使其均勻下沉,然后沿管壁緩緩加入開始層析時(shí)使用的流動(dòng)相,或?qū)⑸V管下端出口加活塞,加入適量的流動(dòng)相,旋開活使流動(dòng)相緩緩滴出,然后自管頂緩緩加入吸附劑,使其均勻地潤濕下沉,在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層。操作過程中應(yīng)保持有充分的流動(dòng)相留在吸附層的上面。濕法:將吸附劑與流動(dòng)相混合,攪拌以除去空氣泡,徐徐傾入色譜管中,然后再加入流動(dòng)相,將附著于管壁的吸附劑洗下,使色譜柱表面平整。
俟填裝吸附劑所用流動(dòng)相從色譜柱自然流下,液面將柱表面相平時(shí),即加試樣溶液。
試樣的加入 除另有規(guī)定外,將試樣溶于層析時(shí)使用的流動(dòng)相中,再沿色譜管壁緩緩加入。注意勿使吸附劑翻起?;?qū)⒃嚇尤苡谶m當(dāng)?shù)娜軇┲?。與少量吸附劑混勻,再使溶劑揮發(fā)去盡后使呈松散狀;將混有試樣的吸附劑加在已制備好的色譜柱上面。如試樣在常用溶劑中不溶解,可將試樣與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入。
洗脫 除另有規(guī)定外,通常按流動(dòng)相洗脫能力大小,遞增變換流動(dòng)相的品種和比例,分別分部收集流出液,至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時(shí),再改變流動(dòng)相的品種和比例。操作過程中應(yīng)保持有充分的流動(dòng)相留在吸附層的上面。
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