花菁染料是近紅外熒光染料中常用的一類熒光染料,細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光在近紅外波段小,能提供高的特異性和靈敏度,菁染料是二個非區(qū)域電荷的氮原子通過聚合搭橋的方式形成的一種分子。
由于Cy染料的結(jié)構(gòu)式特點(diǎn),他們往往有著高的消選光系數(shù),數(shù)值達(dá)100,000Lmol-1cm-1
Cy系列的熒光染料我們一般分為磺酸化菁染料和非磺酸化菁染料non-sulfonated cyanines, and sulfonated cyanines。他們的光譜性質(zhì)基本相同,和蛋白、小分子修飾反應(yīng)也幾乎是一樣的,不同的在于他們的溶解性,非磺酸化菁染料是脂溶性的,磺酸化菁染料是水溶性的,結(jié)構(gòu)式上也會有些不同。
大多數(shù)非磺酸化菁染料都必須在有機(jī)相里去跟蛋白、多肽、抗體及小分子材料進(jìn)行下一步的反應(yīng)。
雖然非磺酸化菁染料和磺酸化菁染料有著相同的熒光特性,但是在具體使用上還是有一些差異性的,非磺酸化菁染料必須溶解在有機(jī)溶劑中如DMF或DMSO中使用,并加入緩沖水溶液buffers來使用,磺酸化菁染料溶解在水中,整個使用過程在水相中進(jìn)行。
大多數(shù)非磺化花菁衍生物(酰肼和胺的鹽酸鹽除外)具有低水溶性。當(dāng)這些分子用于生物分子標(biāo)記時,使用有機(jī)共溶劑(5-20%的DMF或DMSO)對于有效反應(yīng)是必需的?;ㄝ既玖蠎?yīng)首先溶解在有機(jī)溶劑中,然后加入適當(dāng)水性緩沖液中的生物分子(蛋白質(zhì),肽,氨基標(biāo)記的DNA)溶液中。當(dāng)有效地進(jìn)行綴合時,染料在沉淀之前反應(yīng)。
磺酸化菁染料和非磺酸化菁熒光染料可以用于標(biāo)記各種不同的目標(biāo)分子:
l 可在有機(jī)溶劑中溶解的蛋白質(zhì)
l 抗體 (use 5-10% of DMSO/DMF)
l DNA和寡核苷酸
l 多肽
l 其他小分子,包括藥用小分子及抑制劑
磺酸化菁熒光染料可用于:
♦ 在DMF或DMSO中變性的敏感蛋白
♦ 被透析及純化的蛋白
♦ 水溶性的納米粒子
♦ 不溶或疏水的蛋白
非磺酸化菁熒光染料可用于:
♦ 在有機(jī)介質(zhì)反應(yīng)(二氯甲烷、乙腈)