Bel-7402人肝癌細(xì)胞
名稱 | BEL-7402 (人肝癌細(xì)胞) |
別稱 | Bel-7402; BEL 7402; Bel 7402; BEL7402; Bel7402 |
種屬 | 人 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生長培養(yǎng)基 | RPMI-1640+10% FBS+1% P/S |
凍存條件 | 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度:液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相:空氣,95%;CO2,5%溫度:37℃ |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
背景描述 | BEL-7402細(xì)胞是于1974年從臨床肝癌手術(shù)標(biāo)本中建立的;BEL-7402細(xì)胞群體倍增時間為20小時,移植到處理過的Wistar大鼠中的能形成腫瘤結(jié)節(jié),BEL-7402細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣細(xì)胞。在電子顯微鏡下,BEL-7402細(xì)胞亦顯示上皮細(xì)胞所具有的橋粒和張力原纖維,與臨床肝癌細(xì)胞相似。BEL-7402細(xì)胞分瓶培養(yǎng)第四天時,其有絲分裂指數(shù)約為7%。BEL-7402細(xì)胞的染色體數(shù)為不足三倍體,有一個異常的近端著絲點染色體。間接免疫熒光法測BEL-7402細(xì)胞內(nèi)的AFP為陽性反應(yīng);LDH同工酶譜顯示,BEL-7402細(xì)胞與成年人肝細(xì)胞不同,而與人胚肝及臨床肝癌相近。(STR檢測位點同HELA) |
年齡(性別) | 男 |
組織來源 | 肝癌 |
細(xì)胞類型 | 腫瘤細(xì)胞 |
腫瘤類型 | 肝膽癌細(xì)胞 |
生物安全等級 | 1 |
倍增時間 | ~32-48 hours |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1:2 傳代。
9. 注意: 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
公司正在出售的產(chǎn)品:
hs-CRP ELISA Kit | 轉(zhuǎn)基因功能基因BtPCR試劑盒 |
α-Synuclein,α-SYN ELISA Kit | 病毒(BK Virus、BKV)PCR試劑盒 |
2,3-Bisphosphoglycerate(2,3-BPG)ELISA Kit | 嗜吞噬細(xì)胞無漿體PCR檢測試劑盒 |
OT ELISA Kit | 鵝裂口線蟲PCR檢測試劑盒 |
LHRH ELISA Kit | 奧利華斯病毒RT-PCR試劑盒 |
26S-Proteasome(26S-PSM)ELISA Kit | 豬血凝性腦脊髓炎病毒RT-PCR試劑盒 |
OT ELISA Kit | 轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因核suan檢測試劑盒 |
β-Amyloid precursor protein,β-APP ELISA kit | 埃博拉病毒(EBOV)核suan檢測試劑盒 |
5'-3'Exoribonuclease 2(XRN2)ELISA Kit | 阿尼昂尼昂病毒PCR檢測試劑盒 |
β2-Glycoprotein 1 Antibody IgM,β2-GP1 Ab IgM ELISA Kit | 豬源性成分PCR試劑盒 |
OPGL ELISA Kit | MC Ab 小鼠黑色su細(xì)胞抗體ELISA檢測試劑盒 |
α2 macroglobulin,α2 MG ELISA Kit | 15-LO/LOX 人15脂加氧ELISA檢測試劑盒 |
α-Synuclein,α-SYN ELISA Kit | Bel-7402人肝癌細(xì)胞組蛋白脫乙?;?/span>9(HDAC9)ELISA試劑盒 |
26S-Proteasome(26S-PSM)ELISA Kit | 17-OHCS 人17羥皮質(zhì)類固醇ELISA檢測試劑盒 |
17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit | 2,3-dinor-TXB2 人2,3Dinor血栓烷B2ELISA檢測試劑盒 |