奧爾帕瓦約病毒PCR檢測試劑盒說明書

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
以下是奧爾帕瓦約病毒PCR檢測試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

匙羹藤葉 英文名稱：Gymnema sylvestre leaf 規(guī)格：：4g 保存：：-20℃，避光

川楝子 英文名稱：Kawa Ko 規(guī)格：：1g 保存：：-20℃，避光

燈心草 英文名稱：Rush 規(guī)格：：1g 保存：：-20℃，避光

黃芪(膜莢黃芪) 英文名稱：Huang Qi (Ficsh Huang Qi) 規(guī)格：：3g 保存：：-20℃，避光

功勞木 英文名稱：Caulis Mahoniae 規(guī)格：：0.5g 保存：：-20℃，避光

滿山白 英文名稱：Mountain white 規(guī)格：：2g 保存：：-20℃，避光

梧桐子 英文名稱：Wu Tongzi 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

大風(fēng)子 英文名稱：Hydnocarpus 規(guī)格：：5g 保存：：-20℃，避光

雄蠶蛾（家蠶） 英文名稱：Male silkworm moth (Jia Can) 規(guī)格：：1g 保存：：-20℃，避光

香薷 英文名稱：Elsholtzia 規(guī)格：：3g 保存：：-20℃，避光

制何首烏 英文名稱：Radix Polygoni Multiflori 規(guī)格：：3g 保存：：-20℃，避光

橙皮 英文名稱：Orange peel 規(guī)格：：1g 保存：：-20℃，避光

綿大戟 英文名稱：Mian Daji 規(guī)格：：0.1g 保存：：-20℃，避光

款冬花 英文名稱：Flos farfarae 規(guī)格：：2g 保存：：-20℃，避光

奧爾帕瓦約病毒PCR檢測試劑盒說明書小鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA Kit  Mouse Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit

馬錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD/SOD2)ELISA Kit  Horse Superoxide dismutase [Mn],mitochondrial(Mn-SOD/SOD2)ELISA kit

綿羊生長激素(GH)ELISA Kit  Sheep Somatotropin,GH ELISA kit

小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA Kit  Mouse apoptosis inducing factor,AIF ELISA Kit

牛神經(jīng)型一氧化氮合成酶(nNOS/)ELISA Kit  Bovine Neuronal Nitric Oxide Synthase, nNOS/ ELISA Kit

人分泌粒蛋白1(嗜鉻粒蛋白B)(CHGB/SCG1)ELISA Kit  Human CHGB/SCG1 ELISA kit

人唾液酸(SA)ELISA Kit  Human Sialic acid,SA ELISA Kit

小鼠白喉IgG抗體ELISA Kit  Mouse Diphtheria IgG antibody ELISA Kit

人碳酸酐酶9(CA9)ELISA Kit  Human Carbonic Anhydrase 9,CA9 ELISA Kit

猴子內(nèi)毒素(ET)ELISA Kit  Monkey endotoxin,ET ELISA Kit

人空腸彎曲菌(CJ)抗體(IgG)ELISA Kit  Human campylobacter jejuni(CJ)antibody(IgG)ELISA kit

山羊胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA Kit  Goat Insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3 ELISA kit

小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA Kit  Mouse trypsinogen activation peptide,TAP ELISA Kit

人補體C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1(C1QTNF1/CTRP1)ELISA Kit  Human C1QTNF1 ELISA Kit

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。